Cre-loxP 基因重组技术
re-loxP是一种位点特异的基因重组技术,被广泛应用于特异位点的基因敲除、基因插入、基因翻转和基因易位,在真核生物和原核生物中均有广泛应用。Cre-loxP的基本原理Cre蛋白是一种重组酶,是causes recombination的缩写,于1981年从P1噬菌体中被发现,属于λInt酶超基因家族。Cre重组酶基因编码区序列全长1029bp(EMBL数据库登录号为X03453),编码38kDa蛋白质,Cre重组酶 ...
来源:和元生物 59469 阅读
Gateway技术:克隆、表达新方法
Gateway技术提供以下可能:通过去除冗长的亚克隆步骤节省您的时间,同时将您的基因转移到多个表达系统……
来源:互联网 43063 阅读
阳性克隆筛选方法汇总
阳性克隆筛选方法汇总——基于ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9基因敲除方法近几年来,基因重组的技术层出不穷,包括TALEN和CRISPR/Cas9在内的重组技术给基础研究提供更为方便和快捷的分子生物学工具。关于这些技术的具体原理和操作细节,这里不做展开介绍,主要谈一谈在用这些技术进行细胞株构建的过程中,如何做才能加快阳性克隆筛选的步伐。阳性克隆筛选的过程为:将单个细胞,采用有限稀释法接种到96孔板中,待到 ...
来源:江苏吉锐 32518 阅读
成功进行双酶切实验之实战手册
如何保证2天获得正确的克隆?基本操作步骤:Day1:·A:PCR--电泳回收--酶切(1-2小时)--PCR快纯试剂盒回收;·B:载体DNA的酶切(1-2小时)--?如有需要,进行电泳回收。·注:A和B可同步进行节省时间,然后进行连接(设置载体自连对照),室温0.5-1小时,转化Day2:·观察过夜培养的平板上的克隆数:当目的连接板上的克隆数较较对照连接平板上的克隆数多3倍以上时,·可以直接随机挑选2-3个克隆进行测序分析。·注:基本不用 ...
来源:金弗康 30061 阅读