丁香通

目的：克隆微小RNA hsa-miR-148a 并构建逆转录病毒表达载体。

方法：将PCR 扩增得到的miR-148a 前体序列和pMSCV 载体经双酶切连接产生pMSCV-miR-148a 逆转录病毒表达载体，双酶切后测序鉴定，筛选阳性克隆。用pMSCV-miR-148a 和PIK packaging 质粒以磷酸钙共沉淀法转染包装细胞293FT，包装产生逆转录病毒。将病毒感染NIH3T3 细胞进行滴度测定。

结果：经双酶切鉴定和测序证实，成功构建了miR-148a 的逆转录病毒表达载体

pMSCV-miR-148a。并测得病毒滴度为5伊108CFU/ml。

结论：以miR-148a 前体序列构建的逆转录病毒表达载体pMSCV-miR-148a能够产生高滴度的逆转录病毒，为深入研究miR-148a 的生物学功能奠定了基础。

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