标签: 抗体 免疫 电镜
不标记抗体法通过系统的非标记抗体的免疫学反应,对组织中的抗原进行定位检测。分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。用于(1)抗体观察(2)免疫学研究。
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1.固定剂 固定是免疫电镜较关键的一步,免疫电镜中的固定与一般超薄切片中的固定的不同之点在于既考虑保存细胞的超微结构,又要考虑到抗原的失活性问题。 固定液的选择:目前,较广泛应用的固定液为醛类:甲醛、多聚甲醛。戊二醛等。有很多研究者应用4%多聚甲醛和0.05%——0.5%戊二醛混合液,联合应用这两种固定液是因为:1.戊二醛在组织中的穿透速度相对多聚甲醛要慢。有些组织(如神经组织)在未及时固定短暂缺氧后就会引起膜结构的破坏,不利于组织超微结构的保存,因而组织需及时、快速的固定,而醛类中以多聚甲醛在组织中穿透最迅速、固定最及时,2.多聚甲醛能较好的保存组织的抗原性,但对组织结构的保存不理想,而戊二醛是一种二醛基双功能试剂,能较好的交联组织蛋白保持组织的超微结构,因而二者经常联合使用。
2. 固定剂的要求:①不损害细胞内抗原的活性;②固定速度快、效果好;③分子量小,易于渗透;④固定后,不引起交联,造成空间的阻碍,影响标记抗体进入抗原位。 3. 非特异性吸附与酶标抗体、抗血清的稀释度、染色时间,温度及介质等有关,其中最主要的是抗血清及标记抗体的稀释。一般认为高效价抗血清或标记抗体稀释到低蛋白浓度,用于标记染色可获得最理想的结果。
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