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慢病毒包装实验

标签: 慢病毒 包装

详细
实验方法
  • 慢病毒包装实验
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
以六孔板中的1孔为例,每个样品需要1×106个293T细胞。
 
1. 取1.5ml灭菌EP管,加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血清培养基。轻柔混匀,室温孵育5min。
 
2. 取1.5ml灭菌EP管,取9μl 脂质体2000l溶于250μl无血清培养基中。轻柔混匀,室温孵育5min。
 
3. 将DNA溶液和脂质体溶液轻柔混匀。室温孵育20min
 
4. 用胰酶消化并记数293T细胞。用含血清的培养基重悬细胞。
 
5. 在六孔板中每孔,加入1ml含血清的生长培养基,再加入DNA-脂质体复合物。
 
6. 将1ml重悬的293T细胞(1×106个细胞/ml)加入到平板中。37℃CO2孵箱中孵育过夜。
 
7. 移除含有DNA-脂质体复合物的培养基移除,代之以DMEM(含丙酮酸钠和非必须氨基酸)。
 
8. 转染后48-72h收获含病毒的上清。3000 rpm 离心20min,去除沉淀。
 
9. 病毒上清-80°C贮存。
 
包装出来的慢病毒对NIH/3T3细胞达90%以上感染效率。
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