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2008-11-02 ·荧光定量PCR原理与应用 - [Real-Time PCR]
real-time PCR的原理、引物的设计、软件的操作…… 很实用的一个介绍实时定量PCR的课件。 ... [阅读全文]
2008-08-12 ·Amplification and Labelling with Cy dyes - [PCR运用]
1.Two rounds of DNA synthesis to incorporate fixed sequences Prepare the following: Reaction tube containing the following: 7ml DNA to be amplified and labelled 2ml 5X T7 Sequenase Buffer 1ml 50mM Pim ... [阅读全文]
2008-08-06 ·DNA/RNA Real-Time Quantitative PCR - [Real-Time PCR]
DNA/RNA Real-Time Quantitative PCR    点击下载： ... [阅读全文]
2008-08-06 ·Real Time PCR Primer Sets - [Real-Time PCR]
Quantitative RT-PCR is an important step for the validation of expression data generated by cDNA microarray screening and other gene discovery techniques. This has been facilitated by the development ... [阅读全文]
2008-08-06 ·已验证的看家基因LUX™引物对表 - [Real-Time PCR]
各种基因相对于18 rRNA 表达水平 ... [阅读全文]
2008-08-06 ·实时PCR/RT-PCR解决方案 - [Real-Time PCR]
高性能的实时定量PCR和RT-PCR要求高性能的系统。易于使用的qPCR 超级混合物、一步和两步定量RT-PCR系统、以及荧光检测平台，在一个较宽的动态范围内提供更高的灵敏度和特异性，它们利用了最先进的技术，包括： 使用抗体介导热启动技术的Platinum ®　Taq DNA Polymerase提供在室温下组合PCR反应时更高的特异性和产量。 增加了热稳定性和半衰期的SuperScri ... [阅读全文]
2008-07-27 ·新型的基因分型技术(SNP分型):巢式PCR-RFLP技术 - [PCR基础知识]
随着生命科学迅猛的发展，与之相适应的实验技术手段越来越复杂和专业化，对于科研人员实验技能要求也越来越高。由于生物学实验高度的复杂性、使得一个科研人员往往只能精通某一方向的实验。因此许多生物技术公司应孕而生，他们提供了许多专业的服务，其中最常规的技术服务包括核酸、蛋白测序、引物合成，SNP分型动物培养及转基因动物实验。 在国外，生命科学的研究已经初步形成了一个大型技术平台共享的研究形式，科研人员的 ... [阅读全文]
2008-07-27 ·高质量RNA的标准 - [Real-Time PCR]
real time RT-qPCR 是检测样本中特定基因表达量的有效方法，包含逆转录步骤和定量PCR步骤。好的开始是成功的一半，获得高质量的、能正确反应样品中转录情况的RNA，对于其后的定量结果，自然是非常重要的。 Mikael Kubista，教授 R&D TATAA Biocenter主任：    RNA质量包含两个方面：样品的纯度和RNA的完整性。样品纯 ... [阅读全文]
2008-07-23 ·Protocol for Real-Time RT-PCR - [Real-Time PCR]
This protocol describes the detailed experimental procedure for real-time RT-PCR using SYBR Green I as mentioned in Xiaowei Wang and Brian Seed (2003) A PCR primer bank for quantitative gene expressio ... [阅读全文]
2008-07-24 ·定量PCR技术 - [Real-Time PCR]
定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。　　广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型：（1）外参法+终产物分析。所谓“外参法”是指样本与阳性参照在两个反应容器内反应。这种类型没有对样本进行质控监测，易出现 ... [阅读全文]
2008-07-24 ·Quantitative PCR - [Real-Time PCR]
Joseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne AustraliaDavid W. RussellUniversity of Texas Southwestern Medical Center DallasExcerpted From Molecular Cloning: A Labor ... [阅读全文]
2008-07-24 ·实时荧光定量PCR的研究进展及其应用 - [Real-Time PCR]
发布时间04年07月13日 11时13分 　 　　张  蓓  沈立松上海第二医科大学附属新华医院上海儿童医学中心实验诊断中心     多聚集链反应（polymerase chain reactionPCR）技术发明至今已近20年了，在这期间技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR）技 ... [阅读全文]
2008-07-23 ·Real time PCR 动画 - [PCR基础知识]
... [阅读全文]
2008-07-23 ·定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术 - [PCR基础知识]
定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。 广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型 （1）外参法+终产物分析。所谓“外参法”是指样本与阳性参照在两个反应容器内反应。这种类型没有对样本进行质控监测，易出现假 ... [阅读全文]
2008-07-23 ·Real-time PCR 的探针如何设计 - [PCR基础知识]
自90年代Taqman探针诞生以来，虽然荧光探针（引物）不断有新的技术出现，但是作为一种经典的定量PCR技术，Taqman探针技术仍然是许多实验研究人员进行定量检测的首选，这主要是因为相对于SYBR荧光染料，Taqman探针具有序列特异性，只结合到互补区，而且荧光信号与扩增的拷贝数具有一一对应的关系，因此特异性强灵敏度高，而且条件优化容易；而相对于杂交探针，Taqman探针只要设计一条探针，因此探 ... [阅读全文]
2008-07-23 ·Real time PCR 跟RT-PCR有什么区别 - [PCR基础知识]
实时荧光定量PCR原理 所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 1．内标在传统定量中的作用 由于传统定量方法都是终点检测，即PCR到达平台期后进行检测，而PCR经过对数期扩增到达平台期时，检测重现性极差。同一个模板在96孔PCR仪上做96次重复实验，所得结果有很大差异因此无法直接从终点产 ... [阅读全文]
2008-07-23 ·Equipment And Reagents For Real-Time PCR - [PCR基础知识]
In September 1993 Higuchi et al. published a report in the journal Biotechnology (NY). Titled “Kinetic PCR analysis: real-time monitoring of DNA amplification reactions” the paper describe ... [阅读全文]
2008-07-23 ·Real-Time RT-PCR - [PCR基础知识]
RT-PCR (reverse transcription-polymerase chain reaction) is the most sensitive technique for mRNA detection and quantitation currently available. Compared to the two other commonly used techniques for ... [阅读全文]
2008-07-22 ·SNP Detection Technology - [SNP/Microsatellite]
SNP detection and scoring methods are many and various. Two recurrent themes are elegant simplicity and advanced technology. An effective method recently developed by the HGBASE team is Dynamic Allele ... [阅读全文]
2008-07-22 ·TaqMan探针法SNP筛查中文操作手册 - [SNP/Microsatellite]
点击下面链接下载 ... [阅读全文]
2008-07-22 ·SNP检测公司及费用 - [SNP/Microsatellite]
假设样本数为35： 1、采用测序方案：测序一类的公司都可以，生工，英骏，奥科等等，你提供PCR产物，他们进行测序。 2、采用TAQMAN或MGB探针方案：基康，复旦悦达，联合基因等，强烈建议不要采用这种方案，特贵。 3、采用微测序方案：翼和生物。就是应用LDR连接酶的反应，发射荧光的进行检测的。 效果和价钱比较： 测序要你自己做PCR，但测序的好坏要看你PCR产物的质量和测序公司的能力，价格大概 ... [阅读全文]
2008-07-23 ·实时荧光PCR检测技术 - [PCR基础知识]
众所周知，PCR（聚合酶链反应）技术自从1985年问世以来，经过十几年的发展，已成为实验室的常规技术。它是现代分子生物学研究中不可缺少的手段，是一种极为敏感的放大系统。相比于传统的临床诊断方法，核酸诊断是分子水平上的诊断技术，可以弥补传统临床诊断方法的某些缺陷，比如，核酸诊断能直接揭示病原体的存在，能客观反映病原体在人体内感染及活动情况，可以作为临床治疗中的一个有效监控手段，另外采用核酸诊断技术还 ... [阅读全文]
2008-07-22 ·real time PCRTaqman探针设计、实时多重PCR探针的选择、引物的设计及评价 - [PCR基础知识]
一、实时荧光Taqman 探针设计 总原则：探针选择要保守，引物选择要保守，因此必须找一段100-200bp相对要保守的片段来设计引物与探针。即real-time PCR的扩增片段是50bp----150bp。当找不到150bp的保守片段时，必须确保探针的片段是保守的。 在设计探针和引物时，要同时考虑在两条链上设计引物与探针。但要注意的是：在那条链上设计探针时，就应靠近在同一条链上设计的引物(即上 ... [阅读全文]
2008-07-22 ·SNP in MDM2 Promoter - [SNP/Microsatellite]
CELL杂志04年11月份的一篇paper介绍了单个SNP的功能学研究的方法。 点击下面链接下载 A Single Nucleotide Polymorphism in the MDM2 Promoter Attenuates the p53 Tumor Suppressor Pathway and Accelerates Tumor Formation in Humans ... [阅读全文]
2008-07-22 ·实时定量PCR应用中的问题及优化方案 - [PCR基础知识]
聚合酶链式反应（polymerase chain reaction PCR）自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法，而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。随着分子生物学技术研究的不断进展，定量PCR技术取得了突飞猛进的发展，不仅建立了一系列的方法，而且也诞生了许多与这些方法相匹配的新型热循环仪和实验材料。实时定量PCR(real-time quantita ... [阅读全文]
2008-07-22 ·实时定量PCR技术在恶性肿瘤诊断中的应用 - [PCR基础知识]
背景：生物科学和有关技术的发展为恶性肿瘤的诊断和治疗提供了分子学依据。当前，外科病理学主要依据肿瘤的解剖特点（如：转移瘤）和组织病理学对恶性肿瘤分类。微阵列连同聚类分析揭示了肿瘤分子的差异多样性，靠这一点有望建立一个新的与预后有关的分类方法，更重要的是，对疗效有重要的意义。病理学上的挑战将成为常规临床应用分子学分类的发展和补充。 方法：本文重点放在临床实验室中用以DNA为基础的PCR技术来了解实体 ... [阅读全文]
2008-07-22 ·基因表达之RT-PCR之我见 - [PCR基础知识]
在论坛上看到不停地有人在问RT-PCR的问题，实际上在以前的帖子中各位香主和eeflying（我为什么总是提他们？因为还是很佩服的哦，生怕自己说错了，被他们指出来哦）都谈到了很多，鄙人也充大头答了一些问题，但是还是有各种问题，由于的基因表达还有点实战经验（但也技止此而），所以想些点东西给大家参考，计划把包括RNA酶保护分析，northernblot，原位杂交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR都 ... [阅读全文]
2008-07-22 ·Real time PCR检测SNP - [SNP/Microsatellite]
real time PCR检测SNP的方法是：针对目标基因片段的突变位点，设计两条引物，这两条引物的区别仅仅是末端的1-2个碱基不同，分别与突变位点匹配。共同的下游引物和探针。然后扩增。就可以得到不同的CT值，根据CT值的不同，来确定基因类型。 ... [阅读全文]
2008-07-22 ·根据蛋白序列寻找SNP - [SNP/Microsatellite]
0 128);"丁香园网友atcg 0 128);"提到：1 、把蛋白序列对应的核酸序列找到。2 、根据核酸序列做BLAST （对dbSNP数据库http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/snpblastByChr.html）。3 、结果中，可以得到你的序列上所以已知的SNP。 0 128);"丁香园网友 0 128);"freedegree 0 128);"提到：以编码5 ... [阅读全文]
2008-07-22 ·SNP genotyping Tm-shift - [PCR基础知识]
High-throughput SNP genotyping by single-tube PCR with Tm-shift primer 第一部分             第二部分 ... [阅读全文]