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| 2008-10-07 |
·3T3-L1细胞诱导分化 - [传代培养] |
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美国密歇根大学的3T3-L1细胞分化的PROTOCOL(非常详细)
3T3-L1 Differentiation Protocol
MATERIALS
Dulbecco's Modified Eagles Medium (DMEM; GibcoBRL-Cat# 11965-084: high glucose with L-glutamine with pyroxidine HCl witho ... [阅读全文]
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| 2008-10-01 |
·脐静脉内皮细胞培养 - [原代培养] |
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一、试剂和缓冲液配制
1、胎牛血清（氯化十六烷基吡啶）
（1）解冻胎牛血清
（2）在56℃加热30分钟（脱补体作用，盖上瓶）
（3）取25ml上述液体放在无菌的50ml的falcon里分馏
（4）在-20℃冰冻馏份
2、磷酸盐缓冲液（PBS）
（1）无钙镁离子的100ML的PBS（10×）（生命技术）
（2）900ML蒸馏水
（3）2克葡萄糖
（4）在无菌的FALCON里过滤，分馏，在 ... [阅读全文]
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| 2008-10-01 |
·细胞单克隆的分离方法 - [原代培养] |
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一、有限稀释法
材料：
a、96孔细胞培养板等；
b、HT培养基；
c、活力强的杂交瘤细胞；
d、小鼠腹腔细胞。
方法：
a、制备小鼠腹腔细胞。同“细胞融合”一节中的方法。
b、制备待克隆的杂交瘤细胞悬液，用含20%血清的HT培养基稀释至每毫升含2.5、15和50个细胞三种不同的稀释度。
c、按每毫升加入5×104-1×105细胞的比例，在上述杂交瘤 ... [阅读全文]
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| 2008-10-10 |
·原代培养结肠平滑肌细胞 - [原代培养] |
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实验步骤
（一）、取SD 大鼠一只，实验时断椎处死。
（二）、在无菌条件下快速自肛门上2cm 取结肠10cm 左右，生理盐水中反复灌肠冲洗。
（三）、移入含300U/ml青霉素、300U/ml 链霉素的HepesRinger缓冲液中浸泡，肠段内外各15min。
（四）、将经抗生素浸泡过的肠段移入含Hepes Ringer缓冲液的塑料培养板中（培养板预先铺上705胶），在体视显微镜下沿肠系膜对侧纵行 ... [阅读全文]
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| 2008-10-01 |
·MEM粉末配制培养基 - [培养基] |
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GIBCO的MEM粉末包装上面有写：含谷氨酰胺，非必需氨基酸，但是不含碳酸氢钠，没有注明加碳酸氢钠的量。我是用的10%的血清的培养基，是不是配制培养基的时候用900ML的双蒸水就好了呢？需要加碳酸氢钠多少？还需要补充一些什么成分呢？
仔细看看MEM粉末的外包装标签，上面会有加碳酸氢钠的要求。如果没有，大包装盒上一定有，1L*10的大包装盒上有加碳酸氢钠的要求，1L加2.2g碳酸氢钠。否则请你的供应 ... [阅读全文]
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| 2008-10-01 |
·小鼠卵母细胞培养方法 - [原代培养] |
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用M16做成熟培养液Sigma有成品。配方也很简单，你上sigma的网站搜一下就能找到，相关的书上也有。我感觉这个培养液不错，以前自己也配过，但好像不稳定，没有成品好。曾有人推荐我用CZB，效果也很好，不过我没用过。配方也很简单。还有很多人用M199、TCM199等。 ... [阅读全文]
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| 2008-09-22 |
·PC12细胞的其他问题 - [原代培养] |
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PC12传代的消化
丁香园wangpengljr的问题：
我最近养PC12细胞做分化方面的研究，但是遇到的难题是PC12细胞本身的贴壁能力就差（养PC12细胞最好是用Gibco的马血清，Hyclone的不贴壁！），最开始没有用胰酶处理，直接吹打下细胞发现成团现象，用0.02％EDTA的PBS吹打似乎不易成团，但是慢慢地细胞贴壁能力下降了，我用poly－Lys包被都不行。我之所以不用胰酶是因为怕胰酶 ... [阅读全文]
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| 2008-09-22 |
·如何使PC12细胞贴壁更牢 - [原代培养] |
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丁香园ivy_mayan的问题：
在做PC12的H2O2损伤模型时，由于细胞经过H2O2的冲击，大多活性不好了，所以贴壁性变差，结果在测MTT时由于要去掉上清液，细胞会被一同吸走，这样所测吸光值就不准了，请问大家，怎么可以使PC12贴壁更牢（即使经过损伤冲击）？
丁香园george的观点：
1.细胞培养板的选择：一定要用进口的培养板，国产的大多贴不好。
2.尽量使细胞处于良好的状态，包括培养液要新 ... [阅读全文]
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| 2008-09-22 |
·PC12细胞的分化 - [原代培养] |
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丁香园Ginkgokeer的问题：
未分化的PC12在什么情况下会使它产生分化，从而成为分化的PC12？？是不是NGF有这样的作用？除此以外呢？
丁香园sudajyou的观点：
pc12 在未分化时贴壁生长，但最好用5%HS 5%FBS/DMEM培养液，据说PC12在完全没有HS的培养液中贴壁不好。我用的是CORNING的培养皿，PC12贴壁很好。
丁香园忘记宝儿兔兔的问题：
关于pc12细胞即鼠 ... [阅读全文]
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| 2008-09-22 |
·PC12细胞的图片 - [原代培养] |
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丁香园qincym：
【原创】PC12细胞
1.细胞种类：大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞
2.培养的天数：传代后2d
3.放大倍速：倒置显微镜 放大倍数：X100
4.培养基种类：RPMI1640培养基+10%胎牛血清；
5.细胞状态与特征简述:细胞贴壁生长，呈卵圆形或多边形细胞界限清楚，核分裂相明显，有伪足伸出，有的伪足较长甚至连接在一起细胞基本不透光倾向于呈小簇状生长 。
丁香园jackyhoi ... [阅读全文]
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| 2008-09-22 |
·pc12细胞的生长特性 - [细胞百科] |
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丁香园Ginkgokeer的问题：
PC12细胞是什么细胞？或者说它的形态是什么样的？来源呢？
丁香园wack_lry的回答：
来自大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系，它与神经细胞在发生学上均来源于神经脊；在结构、功能上与神经元有很多相似之处，与神经元比较又相对容易培养，故普遍将PC12细胞用作研究神经的细胞模型。
丁香园balabom的问题：
才从别人那里拿来已传代的pc12养，感觉长得很快，两天就要 ... [阅读全文]
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| 2008-09-22 |
·pc12培养 - [原代培养] |
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丁香园myl0605的观点：
前几天为自己养的PC12是未分化还是分化型困扰查了一些资料现发上来希望能给有同样问题的战友有一点帮助!
培养条件:ＰＣ12细胞培养于铺有鼠尾胶原的玻璃培养瓶中置于ＣＯ2培养箱(37℃95%空气5%ＣＯ2)培养基选用ＤＭＥＭ(ｐＨ7.4高糖)加入10%灭活小牛血清及5%灭活马血清。
分化前:ＰＣ12细胞在培养基中多呈圆形直径15～20μｍ也有椭圆或多角形的扁平的细 ... [阅读全文]
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| 2008-09-16 |
·如何杀灭所谓的“黑胶虫 ” - [污染及防治] |
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丁香园网友doctorwyz：
你们好。在我发这份帖子的时候我还在犹豫，是否应该将我的经验如实地告诉给大家，因为所谓的黑胶虫污染十分普遍，难以消除，很多人谈黑色变，我究竟有怎样的方法消灭黑胶虫，我的观点和方法是否能得到大家的认可，无论怎样，我相信我的经验绝对值得大家借鉴，会对那些困扰于所谓的黑胶虫污染的战友们有所帮助。
首先，世界上根本就没有什么黑胶虫，没有人知道黑胶虫的英文名字是什么，没有哪个权 ... [阅读全文]
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| 2008-09-16 |
·关于细胞培养中的污染 - [污染及防治] |
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细胞培养中常见的污染情况总结如下:
常见的污染如下：
1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！
可在培养液中加相应 ... [阅读全文]
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| 2008-09-16 |
·支原体污染的特点及检验 - [污染及防治] |
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丁香园网友simon的观点：
支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0．2um)并独立生活的微生物．约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性．可为圆形、丝状或梨形。
支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构．其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微绒毛相似，但微绒毛电子密度比支原体小，且中央 ... [阅读全文]
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| 2008-09-16 |
·“黑胶虫”问题 - [污染及防治] |
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丁香园网友ronghong_2000的观点：
我们实验室最近一次的情况:
我们前后从上海细胞中心买了三批细胞，细胞刚到的时候，观察均生长良好，密度适中，培养液清亮，也没有见小黑点，但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点，有时候在一夜之间暴长，给培养液加庆大霉素，也无济于事，对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少，但是随后几天又出现，刚开始怀疑操作有问题，但是由有经验的老师操作 ... [阅读全文]
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| 2008-09-16 |
·根本不相信黑胶虫 - [污染及防治] |
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丁香园网友juventus2004的观点：
最近帮同学养细胞系，也看到以前有人发关于黑胶虫的贴，我是养心肌和海马神经元，感觉应该没有黑胶虫，有的话，请问有相关抗体或荧光标记吗？！
个人认为，可能大家用得血清，而且没有处理好，导致的，我这里一直用国产血清，胎牛的，只要用得好，我就猛要求多买几瓶，虽然老师还是不让多买，如果大家用得进口的，当然好。
解冻血清，要先放入4度冰箱，而且要不时地摇晃，均匀的， ... [阅读全文]
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| 2008-09-12 |
·关于细胞污染的一些总结和心得 - [污染及防治] |
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概述
凡混入细胞培养环境中对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染，细胞污染不能完全被消除，但能减少其发生的频率和后果的严重性。细胞污染根据污染源主要可以分为物理性，化学性和生物性污染。
物理性污染的来源、危害及预防：物理性污染常常被人们所忽视或被笼统地归为化学性污染。物理性污染通过影响细胞培养体系中的生化成分，从而影响细胞的代谢。培养环境中的物理因素，如温 度、放射线、振动、辐射(紫 ... [阅读全文]
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| 2008-09-12 |
·给做细胞爬片的战友 一点小窍门 - [原代培养] |
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取一个注射器针头， 针头头部都会有一个斜面，把针尖背对斜面的一方弯曲成90度，记住只是针尖部位，形成一个小倒刺状。取爬片的时候把培养板放倾斜，可在板子下支一个东西，左手拿小镊子，右手拿针头。用针头头部弯好的倒刺，去勾爬片，很容易就会勾起来，而且不会伤片子。再用镊子把片子夹出来。速度比原来提高很多，取一个板子的爬片只要一分钟。
说的不是很清楚 画张图给大家吧 ... [阅读全文]
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| 2008-09-12 |
·人前列腺癌细胞PC－3培养 - [原代培养] |
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丁香园网友kj7156084的培养方法：
本室的PC－3来自上海细胞生物所，种是ATCC的。
以10％FBS＋1640或F12培养，0.25%胰酶消化。塑料瓶或玻璃瓶都可以，当然，前者效果较好。复苏时最好用塑料瓶。
5－7天传一次（1：2），2－3天换一次液。尽量高密度传，因为PC－3细胞喜欢扎堆长，如果过了两三天细胞长得不均匀，可以消化离心一下。
传代后一到两天不要动它，要有耐心。
人前列腺癌 ... [阅读全文]
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| 2008-09-12 |
·HCT116细胞 - [原代培养] |
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丁香园网友五月天天蓝的问题：
请问谁能帮忙介绍一下HCT116细胞株的资料呢?谢谢帮忙请指导.
丁香园网友laugh的观点：
ATCC上有介绍，人结肠癌细胞株，贴壁生长，成瘤性强
以下只说说个人培养时感觉与ATCC有出入的地方
1、推荐培养基MyCoy’s 5A＋10％FBS，个人养下来生长过于迅速，后来改用10％BS或5％FBS，仍然可以1：6传代，隔天长满
2、传代用0.25％胰 ... [阅读全文]
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| 2008-09-12 |
·神经元OGD模型：需要伴随酸中毒吗？ - [原代培养] |
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丁香园网友yql1977的问题：
各位朋友，今天跟我师弟讨论一个问题，神经元OGD时是否要将缺氧液配成酸性的，我认为酸中毒和高钾血症等并发症是机体缺血后造成的后果，因此不必人为制造酸中毒，而且关于神经元OGD的大量文献也没有特意提及缺氧液的PH值。而我师弟认为在体情况下缺血时会伴有酸中毒及高钾血症，因此造模时应该造成酸中毒甚至高钾的环境，不过他做的是心肌，关于心肌的文献大部分都说明缺氧液PH在6. ... [阅读全文]
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| 2008-09-12 |
·HepG2细胞培养的相关条件 - [原代培养] |
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HepG2人肝肿瘤细胞株广泛应用于遗传毒理学及病毒培养等方面的研究研究肝脏疾病发病机理及其临床应用有着重要意义。由于其与肝细胞具有相同的生物学活性，还被用于胰岛素抵抗的研究。本文对肝癌细胞培养的最佳条件做一简单综述。
1、HepG2细胞的复苏条件
（1）复苏温度的选择
唐孟萱等采用下述方法进行细胞复苏：快速将所冻存细胞40℃水浴摇床60转/ min慢摇至其溶解，溶解后马上转入 37 ℃水浴箱，手工 ... [阅读全文]
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| 2008-09-12 |
·关于乳鼠心肌细胞的培养 - [原代培养] |
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丁香园网友roseluo425的观点为：
1、0.08％胶原酶II＋0.125%胰酶等比混合后消化
2、消化前后一定要轻柔吹打
3、重悬时要充分吹打，动作轻柔（100次）
4、种板密度要合适
5、当然血清，板都要进口，别图便宜
6、别忘了检查CO2温箱的情况
丁香园网友ljm123的观点为：
1、首先是选择乳鼠时最好是出生3天内的以我的经验来看活力是较好的皮肤看起来是暗红色的再大一点的话皮肤变厚变 ... [阅读全文]
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| 2008-09-12 |
·制取原代CEF的心得 - [原代培养] |
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纯化病毒第一步
剪碎法CEF的制备
实验前准备
PH7.2 PBS（SW配）﹑平皿一小包（３个）﹑饭盒１（器械，玻璃漏斗）﹑饭盒2（纱布）﹑离心管２﹑碘酊﹑废液缸﹑０.１％新洁尔灭溶液﹑０.２５％胰酶﹑９日龄ＳＰＦ胚２﹑Ｍ１９９培养基
实验步骤
Ⅰ 首先SPF胚新洁尔灭溶液表面消毒，再碘酊﹑酒精消毒，最后小心敲破气室
Ⅱ 准备两把眼科弯头镊子，一把撕破尿囊膜和羊膜，另一把夹鸡胚。用镊子把鸡胚取出， ... [阅读全文]
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| 2008-09-10 |
·细胞裂解 - [细胞成分提取] |
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裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。这两种方法（包括SDS 和溶菌酶处理等）提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA 的断裂。
一、机械裂解法主要有以下两中：
1、热休克（Thermal shock），既 ... [阅读全文]
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| 2008-09-10 |
·支原体污染 - [污染及防治] |
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支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径0．2um)并独立生活的微生物．约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性．可为圆形、丝状或梨形。
支原体形态多变，在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构．其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微绒毛相似，但微绒毛电子密度比支原体小，且中央无颗粒群或中央束。
支原体 ... [阅读全文]
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| 2008-09-10 |
·PBS相关资料 - [其他试剂] |
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PBS的配制：
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCL，0.2g KCL，1.44g 磷酸氢二钠和0.24克磷酸二氢钾，用HCL调节溶液的pH值至7.4，加水定容至1升，在1.034x10（5），高压蒸汽灭菌20分钟。室温保存。一般用于实验室中的PBS缓冲液都是这样配制，而不用摩尔分数表示。
PBS(Phosphate-buffered Saline) 分子克隆上的配方
NaCl: 8g
KCl: ... [阅读全文]
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| 2008-09-10 |
·胶原酶 - [其他试剂] |
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丁香园网友yuanjianmei的问题为：
胶原酶2一定要用D-hank's液配制吗？
消化血管细胞一次要用多少啊？
丁香园网友张艳红的观点为：
用D-hank's液配制也可，但不一定。我做的是软骨细胞的原代培养，用的是1640完全培养基配制的。你消化血管细胞如果是做原代培养，我估计用6-8ml就可。我用时每次用8-10ml。当然，这也得视取用的组织特性和组织的量而定。仅供参考。
丁香园网友ww ... [阅读全文]
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| 2008-09-10 |
·肿瘤细胞培养 - [原代培养] |
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肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。
一、组织培养肿瘤细胞生物学特性
肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿 ... [阅读全文]
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