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选择分类浏览:
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| 2008-06-06 |
·大规模动物细胞培养的问题及对策 - [原代培养] |
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动物细胞培养开始于本世纪初，到1962年规模开始扩大，发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法，利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等，已成为医药生物高技术产业的重要部分。由于动物细胞体外培养的生物学特性、相关产品结构的复杂性和质量以及一致性要求，动物细胞大规模培养技术仍难于满足具有重要医用价值生物制品的规模生产的需求，迫切需要进一步研究和发 ... [阅读全文]
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| 2008-06-06 |
·细胞的分裂指数测定 - [细胞周期/增殖/凋亡检测] |
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一、原理
体外培养细胞 生长、分裂繁殖的能力，可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。
分裂指数指细胞 群体中分裂细胞 所占的百分比，它是测定细胞 周期的一个重要指标，也是不同实验研究选择细胞的重要依据。
二、仪器、用品与试剂
1、仪器与用品：CO2培养箱、普通显微镜、培养血、盖玻片、吸管。
2、试剂：培养液、胰酶、甲醇、冰醋酸、Giem ... [阅读全文]
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| 2008-06-06 |
·细胞计数及活力测定 - [细胞周期/增殖/凋亡检测] |
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一、原理
培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。
在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞 ，总细胞 中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞 一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。
用台盼兰染细胞 ，死细胞着色，活细胞不 ... [阅读全文]
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| 2008-06-06 |
·细胞周期的测定 - [细胞周期/增殖/凋亡检测] |
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一、原理
细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。
单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。
测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞 计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。
BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料 ... [阅读全文]
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| 2008-06-07 |
·细胞培养技术 - [细胞百科] |
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细胞培养的一般过程
一、准备工作
准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试，具体内容可参阅有关文献。
二、取材
在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散 ... [阅读全文]
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| 2008-06-07 |
·细胞系或细胞株的建立 - [细胞百科] |
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各种已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系或细胞株，都是一些形态比较均一、生长增殖比较稳定的和生物性状清楚的细胞群。因此凡符合上述情况的细胞群也可给以相应的名称，即文献中常称之为已鉴定的细胞（Certified Cells）。已鉴定的细胞可用于各种实验研究和生产生物制品。当前世界上已建的各种细胞系（株 ... [阅读全文]
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| 2008-06-07 |
· 电穿孔和电融合技术 - [细胞百科] |
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细胞电穿孔和电融合的基本原理、基本技术及实验步骤。
[阅读全文]
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| 2008-06-05 |
·细胞的传代培养 - [传代培养] |
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一、原理
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。
传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
二、材料和试剂
1、细胞：贴壁细胞株
2、试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清）
3、仪器和器材：倒置 ... [阅读全文]
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| 2008-06-05 |
·磷酸钙细胞转染技术 - [细胞百科] |
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1 了解细胞转染技术原理和基本方法
2 磷酸钙沉淀法的基本技术要点
磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法，磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作用进入靶细胞，被转染的DNA可以整合到靶细胞的染色体中从而 ... [阅读全文]
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| 2008-06-05 |
·细胞的原代培养 - [原代培养] |
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一、原理
将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
二、仪器、材料及试剂
仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）
材料：胎鼠或新生鼠
试剂：1640 ... [阅读全文]
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| 2008-06-05 |
·细胞周期的测定 - [细胞周期/增殖/凋亡检测] |
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一、原理
细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。
测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。
BrdU （5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞D ... [阅读全文]
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| 2008-06-05 |
·个别组织细胞的培养 - [原代培养] |
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体内组织细胞在体外培养时，所需培养环境基本相似，但由于物种、个体遗传背景及所处发育阶段等的不同，各自要求条件有一定差别，所采取的培养技术措施亦不尽相同，现介绍个别组织细胞培养的要点如下：
一、上皮细胞培养
上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮组织，故上皮细胞培养特别受到重视。但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞，培养时生长速度往往超过上皮细胞，并 ... [阅读全文]
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| 2008-06-05 |
·无菌操作注意事项 - [细胞百科] |
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体外培养细胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。即便使用设备完善的实验室。若实验者粗心大意，技术操作不规范也会导致污染。因而．为在一切操作中为最大可能的保证无菌。每一项工作都必须做到有条不紊和完全靠。
【培养前准备】在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。根据实验要求，准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内，然后开始 ... [阅读全文]
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| 2008-06-05 |
·细胞中的微丝染色及微丝与细胞形态的实验观察 - [细胞形态检测] |
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一、成纤维细胞微丝的染色及其对细胞松驰素B的反应
(一)原理
微丝普遍存在于多种细胞，对细胞的形状和运动有一定作用。细胞松驰素B可与微丝的亚单位肌动蛋白结合，从而破坏微丝，改变细胞的形状。
（二）细胞松驰素B处理成纤维细胞与染色观察
1、在平皿中有三张成纤维细胞贴壁生长的盖片，在超净工作台内将一张盖片移入另一皿中继续培养，用作对照。
2、在有两片的平皿内加100μ ... [阅读全文]
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| 2008-06-05 |
·细胞的冻存和复苏 - [细胞百科] |
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一、原理
在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞最易受损的-5～0℃，细胞仍能生长，活力受损 ... [阅读全文]
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| 2008-06-05 |
·细胞器的光镜切片和电镜照片观察 - [细胞百科] |
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一、三种细胞器的光镜切片
（一）高尔基复合体(Golgi Complex)
用镀银法染色的豚鼠脊神经节光镜切片:神经细胞因合成运输大量的蛋白质而含有发达的内质网和高尔基复合体，在低倍镜下观察，神经节的假单极细胞体被神经束分隔成群。神经细胞的胞体呈圆形或椭圆形。转换高倍镜观察，细胞中央不着色的圆形区为细胞核。在核的周围有黑褐色颗粒状或呈不规则的条索状结构即为高 ... [阅读全文]
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| 2008-06-05 |
·液泡系的活体染色及电镜照片观察 - [细胞百科] |
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一、蟾蜍胸骨剑突软骨细胞液泡系活体染色及观察
(一)原理
在动物细胞内，凡是由膜所包围的小泡和液泡除线粒体外都属于液泡系，包括高尔基器、溶酶体、微体、消化泡、自噬小体、残体、胞饮液泡和吞噬泡，都是由一层单位膜包围而成。软骨细胞内含有较多的粗面内质网和发达的高尔基复合体，能合成与分泌软骨粘蛋白及胶原纤 ... [阅读全文]
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| 2008-06-05 |
·细胞膜 - [细胞百科] |
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细胞膜(cell membrane)又称质膜（plasmalemma)是包裹于细胞表面，将细胞与外界微环境隔离的界膜，形成一种屏障，并参与细胞的生命活动。
一、细胞膜的结构
细胞膜厚度约为7.5～10nm，在高倍电镜下细胞膜呈现为平行的三层结构，即电子致密的内、外两层（各厚2.5～3.0nm）与电子透明的中间夹层（厚3.5-4.0nm )。细胞膜的化学组成主要是脂类、蛋白质和糖类。 ... [阅读全文]
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| 2008-06-05 |
·细胞质 - [细胞百科] |
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细胞质(cytoplasm)又称胞浆是由细胞质基质、内膜系统、细胞骨架和包涵物组成。
（一） 细胞质基质
细胞质基质又称胞质溶胶（cytosol)是细胞质中均质而半透明的胶体部分，充填于其它有形结构之间。细胞质基质的化学组成可按其分子量大小分为三类，即小分子、中等分子和大分子。小分子包括水、无机离子；属于中等分子的有脂类、糖类、氨基酸、核苷酸及其衍生物等；大分子则包括 ... [阅读全文]
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| 2008-06-03 |
·细胞核 - [细胞百科] |
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在HE染色切片上，细胞核(nucleus)以其强嗜碱性而成为细胞内最醒目的结构。由于它含有DNA－－遗传信息，因此，借DNA复制与选择性转录，细胞核成为细胞增殖、分化、代谢等活动中关键环节之一。人体绝大多数种类的细胞具有单个细胞核，少数无核、双核或多核。核的形态在细胞周期各阶段不同，间期核的形态在不同细胞亦相差甚远，但其结构都包括核被膜，染色质，核仁与核基质四部。
(一）核被 ... [阅读全文]
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| 2008-06-03 |
·细胞周期 - [细胞百科] |
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细胞周期（cell cycle)是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，分为间期与分裂期两个阶段 。
（一）间期
1.G
2.S期 是细胞周期的关键时刻，DNA经过复制而含量增加一倍，使体细胞成为4倍体，每条染色质丝都转变为由 ... [阅读全文]
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| 2008-06-03 |
·神经细胞培养基质总结 - [培养基] |
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培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
基础培养基
绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液（BSS）基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ha ... [阅读全文]
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| 2008-06-03 |
·细胞培养用液的配制与消毒 - [培养基] |
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一、器材与试剂：
干粉型培养基、胰蛋白酶、青霉素、链霉素、纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器。
具体步骤：
(1)水的制备：
细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水。
(2)PBS的制备与消毒(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：
1 ... [阅读全文]
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| 2008-06-02 |
·细胞生物学名词解释（1） - [细胞百科] |
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1. 细胞(cell)
细胞是由膜包围着含有细胞核(或拟核)的原生质所组成 是生物体的结构和功能的基本单位 也是生命活动的基本单位。细胞能够通过分裂而增殖，是生物体个体发育和系统发育的基础。细胞或是独立的作为生命单位 或是多个细胞组成细胞群体或组织、或器官和机体；细胞还能够进行分裂和繁殖；细胞是遗传的基本单位，并具有遗传的全能性。
2. 细胞质(cell plasma)
是细胞内除核以外的原生质 ... [阅读全文]
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| 2008-06-02 |
·细胞分化与肿瘤 - [细胞百科] |
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肿瘤是细胞在各种致瘤因素的作用下，基因发生改变，失去对其生长的正常调控，导致细胞异常增生。恶性肿瘤又称为癌症（cancer），是目前危害人类健康最严重的一类疾病。我国城市地区居民死因第一位为恶性肿瘤。
肿瘤细胞在很多生物学特性上不同于正常细胞，也有别于修复性增生的细胞，具有明显的去分化现象。
一、肿瘤细胞的分化特征
恶性肿瘤细胞的特征之一是分化程度低，表现为形态上的幼稚性，功能上的异常 ... [阅读全文]
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