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2008-08-26
·制作精良的细胞凋亡课件 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
预览：
点击下载幻灯：细胞凋亡.rar ... [阅读全文 ]
2008-08-26
·凋亡形态学图片 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
这幅图很精辟的解释了凋亡的内涵，所以放在第一张，各位慢慢体会。 [阅读全文 ]
2008-08-26
·细胞凋亡与坏死及细胞程序性死亡的区别 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
Kerr（ 1972）最先提出凋亡的概念，与细胞坏死的区别是：
• ①细胞通过出芽的方式形成许多凋亡小体；
• ②凋亡小体内有结构完整的细胞器；
• ③不引起炎症；
• ④线粒体无变化，溶酶体活性不增加；
• ⑤内切酶活化，DNA有控降解，凝胶电泳图谱呈梯状；
• ⑥凋亡通常是生理性变化，而细胞坏死是病理性变化。
细胞程序性死亡（prog ... [阅读全文 ]
2008-08-25
·胃癌细胞培养心得及真菌感染应对方案 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
本人养胃癌细胞sgc-7901已经半年多了，这半年来，可以说是及其不顺，同门的师哥师姐都说这个细胞很好养，增殖快，传代快，生命力旺盛，不容易感染，然，到我这里似乎就不像他们说的那样，问题接二连三的出现，但我从这一连串的失败中从一个懵懂无知者变成一个动作娴熟的能手，说句实在话还得感谢这批细胞给我带来的宝贵经验。
首先我要说一点：无菌操作
刚一接手细胞时，无菌相关事项早已耳熟能详，但我的第一批细胞在传 ... [阅读全文 ]
2008-08-25
·TNF的生物活性测定 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
1． 材料和试剂
1.1培养液A ：DMEM培养液添加10%的胎牛血清（FBS）。
1.2培养液B：DMEM培养液添加10%的胎牛血清（FBS）和终浓度为0.7--1μg/ml
的放线菌素D。
1.3 L929细胞株：鼠结缔组织纤维母细胞，来源于22天雄性C3H鼠皮下组织。
1.4 结晶紫染色溶液：0。05%结晶紫 (50mg结晶紫加入20ml乙醇加蒸馏水 ... [阅读全文 ]
2008-08-25
·染色体制片程序 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
1、取对数生长期细胞一个T75或T25瓶。
2、将培养基换成10ml DMEM(H)+10%FBS+0.1ug/ml秋水仙素的培养基，处理1~2小时。
3、将细胞培养液倒掉，马上加入3~4ml 0.1%胰蛋白酶，并立即摇晃0.5~1min。当在显微镜下看到分裂相细胞脱壁后，马上加入终止液终止消化，并将分裂相细胞收集在一个15ml的离心管中，并在1200r/min离心4min。
4、将上清液倒掉，剩 ... [阅读全文 ]
2008-08-19
·神经细胞培养 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
一、设备：
无菌操作设备。
二、大型设备CO2培养箱：
恒温5%、10%CO2维持培养液中pH值
倒置显微镜：用于每天观察贴壁细胞生长情况
解剖显微镜，用于准确地取材
常温冰箱：-4℃，用于保存各种培养液，解剖液和鼠尾胶
低温冰箱：-20℃--80℃，用于储存血清酶，贵重物品和试剂
电热干烤箱：用于消毒玻璃器皿
高压消毒锅：用于消毒培养皿，手术器械
过滤器：配制解剖液、培养液，必须过滤后才 ... [阅读全文 ]
2008-08-14
·有关MTT 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
MTT有下面一些优点：
1、有灵敏度高，重复性好，
2、操作简便、经济、快速、易自动化的优点，
3、而且没有3H—TdR掺入试验放射性污染，
4、还可以减少如细胞计数法、软琼脂克隆形成试验中的人为性因素
所以可以选择这种实验方法
丁香园网友jiangql的观点为：
MTT 理论可以参见司徒镇强，吴军正主编. 细胞培养. 西安：世界图书出版社. 1996.
MTT，3-(45-dime ... [阅读全文 ]
2008-08-08
·最全面的MTT相关技巧大汇总 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
（一）实验前应明确的问题
1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不 ... [阅读全文 ]
2008-08-05
·细胞凋亡的检测 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式，根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别，可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多，下面介绍几种常用的测定方法。
一、细胞凋亡的形态学检测
根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。
1、光学显微镜和倒置显微镜
（1）未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体 ... [阅读全文 ]
2008-08-05
·细胞凋亡 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
细胞程序性死亡是正常生理现象，多发生于胚胎发育和维持组织自身平衡。Kerr et al.最早发现有两种细胞死亡：坏死（Necrosis）和凋亡（Apoptosis）。Apoptosis，希腊文意思是树叶从树上“凋落”，这里是指凋亡，是细胞主动参与自身死亡的过程。凋亡程序有一些特殊形态学特征，包括质膜的改变，如细胞膜不对称性和细胞附着消失，胞浆和细胞核固缩，核内DNA裂解。到 ... [阅读全文 ]
2008-08-05
·流式检测凋亡的讨论 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
关于凋亡的流式检测
wanhood
一、PI单染色法
基本原理
其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面：
1.细胞核的改变：由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋 ... [阅读全文 ]
2008-08-05
·关于细胞凋亡的讨论 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
细胞调亡与坏死鉴别的简便方法 midas
1、PI和Hoechst33342双标：
PI、Hoechst33342均可与细胞核DNA（或RNA）结合。但是PI不能通过正常的细胞膜，Hoechst则为膜通透性的荧光染料，故细胞在处于坏死或晚期调亡时细胞膜被破坏，这时可为PI着红色。正常细胞和中早期调亡细胞均可被Hoechst着色，但是正常细胞核的Hoechst着色的形态呈圆 ... [阅读全文 ]
2008-08-05
·TUNEL方法检测凋亡的讨论 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
TUNEL方法检测凋亡的原理
ljksbs ：细胞凋亡中 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal -deoxynucleotidyl ... [阅读全文 ]
2008-08-05
·关于PI（碘化丙啶）的讨论 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
组织中的细胞周期和凋亡检测方法之一－－PI法
schoman
无论是肿瘤或其它正常新鲜组织均可用PI（碘化丙啶）的方法来检测，这是一种常见而且便宜的方法。主要操作步骤如下：
1、组织块用0.25%胰酶消化30min－1h。
2、200－400目筛网过滤细胞，获得单细胞悬液。
3、75％乙醇（－20度预冷）固定细胞1h。
4、加入PI（终浓度50ug／ml）和无DNA酶污染的RNA酶（终浓度 ... [阅读全文 ]
2008-08-05
·Hoechst染色的讨论 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
Hoechst染色的具体步骤
caspase8428：我看到资料上说，荧光染色的时候可以用DAB与荧光物质反应生成沉淀。那么，Hoechst染色时，什么时候加DAB，浓度是多少，用什么稀释，最后怎么来终止反应？是不是还要用抗退色固片介质来封片？
sunandsuny：Hoechst染色时无需用DAB来显色，它直接结合细胞的DNA ，经过紫外光激发后发出蓝色荧光。如果你是用来染培养的细胞的话，可以参 ... [阅读全文 ]
2008-08-05
·DNA LADDER检测细胞凋亡的讨论 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
例一
gongyulai ：我用的是药物诱导癌细胞凋亡，做DNA Ladder（用的是北京鼎国的动物细胞凋亡梯子提取试剂盒）。跑出来的电泳不是一条条带，而是每条很长的拖尾现象，Marker到是出来了。我是按说明书上0。8%的琼脂糖。我用的是60v电压。不知道什么原因？郁闷。说明书上说混合温和是什么意思，我又没用力摇。我还想问收集凋亡细胞时离心时转速多少比较好？
chujun_hust ：
（1） ... [阅读全文 ]
2008-07-29
·FACSCalibur的使用程序 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
FACSCalibur的使用程序
点击下面的链接下载： ... [阅读全文 ]
2008-07-23
·MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4，5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3，5-di- phenytetrazoliumromide， MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成 ... [阅读全文 ]
2008-07-23
·细胞爬片经验 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
进实验室这么长时间了，每一天都好像过得很艰难，每一项实验的完成都很辛苦，其中的每一个细节都不能大意，不然做得一切都要前功尽弃。
实验室里没有人做细胞爬片，我连见都没见过，老板的实验却要求这个东西，只能自己摸索。查资料 搜信息，自己实践，终于做出了可以用来后期实验的细胞爬片。
总结经验如下：
首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜， ... [阅读全文 ]
2008-07-23
·四唑盐（MTT）比色法 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
四唑盐（MTT）商品名为噻唑蓝
操作步骤
一、接种细胞
1、用胰蛋白酶消化汇合的单层细胞，将细胞收集到含血清的培养基中。 2、离心细胞悬液，使细胞沉积下来。用培养基重悬细胞，计数。 3、将细胞稀释至2.5×103-50×103 个/ml，每个微滴定板可容纳20ml细胞重悬液。 4、用加样器在平底96孔板中间十列的各孔中加入200μl细胞悬液，每孔加0.5&tim ... [阅读全文 ]
2008-07-23
·细胞培养板的选择和使用（四） 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
（一）培养板的清洗和消毒
培养板一般为一次性使用，尤其在接触了有毒、有害等物质后更应该处理后丢弃。但如果要反复使用则一定要进行正确的清洗和消毒，以保证细胞培养的效果。
问：只有紫外照射可以保证无菌吗?可不可以从清洗方面做点工作?
答：看你什么用途了，一般贴壁生长的细胞用重复利用的培养板效果不是很好，因为培养板表层在生产时涂有一层促进细胞贴壁的物质，在清洗后多半会失去。悬浮或是半悬浮生长的细胞还可 ... [阅读全文 ]
2008-07-22
·细胞凋亡的形态学观察 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
细胞凋亡（apoptosis）的命名主要是根据某些单个细胞死亡时细胞碎裂如花瓣或树叶散落般的形态学特征。目前对细胞凋亡的认识正不断得到深化，检测凋亡细胞的方法也逐渐增多，但形态改变仍是确定细胞凋亡的最可靠的方法。
一、光学显微镜观察
凋亡细胞的主要特征为核染色质致密深染，形成致密质块，有时可碎裂。在HE染色的组织切片中细胞体积缩小，胞质致密、嗜酸性染色增强，并可形成凋亡小体。在组织中凋亡细胞常以分 ... [阅读全文 ]
2008-07-22
·细胞凋亡检测技术与方法 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
细胞凋亡（Apoptosis），又称细胞程序性死亡（PCD： Programmed Cell Death），是指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。它是一个主动的，高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。细胞凋亡概念提出至今还不到30年的时间，但由于它在保证多细胞生物的健康生存过程中扮演着关键角色，对个体的正常发育及细胞凋亡紊乱在病理学研究中的重要作用，引起了人 ... [阅读全文 ]
2008-07-21
·几种检测凋亡的方法 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
一、形态学观察方法
（一）HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。
（二）丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
（三）台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色 ... [阅读全文 ]
2008-07-23
·流式、WB、RT－PCR等实验所需细胞数问题 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
1、流式所需细胞数http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=8952457&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0#8952457 （【求助】做流式的细胞用25ml的培养瓶培养，细胞数够嘛？）http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5824985_1.html （ ... [阅读全文 ]
2008-07-21
·The MTT Cell Proliferation Assay 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
INTRODUCTION
Measurement of cell viability and proliferation forms the basis for numerous in vitro assays of a cell population’s response to external factors. The reduction of tetrazolium salts ... [阅读全文 ]
2008-07-21
·细胞培养板的选择和使用（三） 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
培养板的包被及相关问题：为了适应不同的实验需要，可对培养板用不同的物质进行包被后使用，这其中有促进细胞黏附的，也有用于一些特殊检测需要的。不同的实验目的可能具体的方案亦不同，根据需要灵活掌握。
(一)多聚赖氨酸包被：问：我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞培养板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子
答：配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要 ... [阅读全文 ]
2008-07-21
·细胞培养板的选择和使用（二） 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
(一)细胞培养板的密闭和污染问题：
细胞培养板的加样和操作：细胞培养板在进行细胞操作时同样遵循严格无菌的原则，各项操作要保证规范、科学，不对细胞的生长造成额外的影响。这其中最常见的问题就是如何保证加样后细胞的均匀和尽量减少换液对细胞生长状态的影响。
问：96，24孔培养板或培养皿的盖子都很松，这样是方便了透气，但是细菌、霉菌等污染物会不会也随着溜进去呢？ 答：1.盖子很松，属于半开放培养 ... [阅读全文 ]
2008-07-22
·常用细胞凋亡检测方法（图） 细胞周期/增殖/凋亡检测 ]
一、细胞凋亡的形态学检测
1、光学显微镜和倒置显微镜
（1） 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。
（2） 染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。2、荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜
一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋 ... [阅读全文 ]
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