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< 细胞培养 - 533 篇
+ 冻存与复苏 - 23 篇
2008-09-10
·细胞冷冻保存方法、注意事项 冻存与复苏 ]
1、欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 ％致密度。
2、冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。
3、注意冷冻保护剂之品质。DMSO 应为试剂级等级，无菌且无色(以0.22 micron FGLP Telflon 过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650 ... [阅读全文 ]
2008-08-25
·培养细胞的冷冻保存与复苏 冻存与复苏 ]
概述
Spallanzani（1776）最早发表了冷“处理”对“细胞”生命活动影响的报道，他用雪冷冻玻璃瓶中的马精子10多分钟之后，再将玻璃瓶放回室温下，发现了一个令人惊奇的现象，那些原本已经不动了的精子又“复活”了，就好象是刚从输精管排出来的一样，冷处理延长至数十分钟，情况依然如此。于是，他认为冷不能杀死精子。大约100年 ... [阅读全文 ]
2008-08-26
·细胞复苏失败的原因分析 冻存与复苏 ]
问：以前拿回细胞后，传代、冻存后复苏过几次都没什么问题，最近因实验室孵箱污染，清洁消毒细胞室后，重新复苏，结果连续复苏6支，细胞均未贴壁，今晚复苏6小时后观察有一瓶相对贴壁细胞数较之前复苏失败瓶多，但贴壁细胞状态不好，形态不佳，透光度亦不好！急求各位大侠会诊指导！
答：juventus2004认为复苏过程没有问题的，是否是从液氮拿出直接放入温水？培养箱问题，二氧化碳浓度？培养基问题？PH值？要么加 ... [阅读全文 ]
2008-08-08
·细胞株的培养、冻存和复苏 冻存与复苏 ]
1、细胞株的培养和传代
培养：
用于检测细胞因子的细胞株通常培养于含10％小牛血清和抗生素的培养液中，培养细胞因子依赖细胞株还有加入适量细胞因子。在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养，3～4天传代一次。
悬浮生长细胞的传代：
直接直接吸去或离心后吸去培养上清液，用新鲜培养液悬浮细胞，1：3或1：5稀释细胞后，分瓶继续培养。
帖壁生长细胞的传代：
吸去培养液，用PBS洗涤细胞一次，加 ... [阅读全文 ]
2008-08-07
·细胞冻存、解冻方法与细胞计数 冻存与复苏 ]
一、细胞冷冻保存
1、材料：
生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、0.4％（w/v）trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII)
2、冷冻保存方法：
（1）传统方法: 冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟---& ... [阅读全文 ]
2008-08-06
·程序冷冻仪里的异丙醇为什么只能用五次？ 冻存与复苏 ]
请问哪位知道加在程序冷冻仪里的异丙醇为什么只能用五次？它的原理是什么？
没用过冷冻仪，但用过异丙醇冻存盒。异丙醇在冷冻细胞的过程中可以辅助实现缓慢降温，直接从室温放进-80可以达到近似于1度/分钟；在冷冻仪里可能会起到平滑降温曲线的作用。但它易挥发，并且容易吸收空气中的水分，所以过长时间的使用后浓度会下降，影响其控温性能。为了保持良好的冻存效果，还是勤换一些好。
... [阅读全文 ]
2008-08-05
·细胞培养中霉菌污染问题 冻存与复苏 ]
Julius：我的细胞被污染了，表现为培养液内有浑浊，可见很多白色粉末的东西悬浮，之前发现一瓶有，就丢了，剩下的及时换液，清洗，可在传代后的第二天就又见浑浊，仍有部分细胞是贴壁的，可以看到很多”细胞“首尾相连成一条条的线状，可细胞怎会是线状生长呢？（抱歉没有拍下照片）请问是霉菌还是细菌污染呢？如何区分细菌，霉菌及真菌的污染。现在如何处理呢？污染控制区大家所说的用甲醛熏蒸，碘 ... [阅读全文 ]
2008-08-04
·细胞冻存和复苏技术 冻存与复苏 ]
一、原理
在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞最易受损的－5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。
目前常 ... [阅读全文 ]
2008-07-16
·新购进细胞株的问题 冻存与复苏 ]
正在定购MG63 ，即人成骨头瘤细胞，但是以前没买过，都是从别人那直接扩培的，所以对于刚拿到细胞株要做的不清楚，恳请有经验的战友提供帮助。 打算买三瓶，新购进时应该会配培养基，那我是否需要提前配培养基（按厂家提供的培养基配方，是一拿到手直接冻到液氮里吗？还是先培养几天再冻？查文献发现很多种培养基都可以用，可否用实验室已有培养基培养，大约需要多久后才能用实验室的培养基培养。
对于新买的细胞，必然是有 ... [阅读全文 ]
2008-07-16
·复苏L929记录（图） 冻存与复苏 ]
头一次自己培养L929细胞，手忙脚乱的，把冷冻的细胞直接放进培养基里就结束了。过了60个小时，去显微镜下看，只能看到几个帖壁细胞。仔细想想做实验的步骤，又上网查查帖子，觉得可能是没有在第二天换新培养基的问题，导致冷冻液里的DMSO影响细胞贴壁。不知道培养皿里的细胞还有没有活下去的可能。总之第一次做实验结果不好也不应该轻易放弃。
把培养皿里的上清液转移到离心管里，离心，加入新的培养基重新放到培养箱里 ... [阅读全文 ]
2008-07-15
·杂交瘤细胞复苏失败原因 冻存与复苏 ]
最近，我把杂交瘤细胞复苏了，可是做了三次都死掉了。同期复苏的SP2/0却能活。1，我的细胞是在-76保存，放了半年，2，-76的冰箱温度有波动，经常打开门，3，细胞复苏后大量死亡，但是也有很少的比较圆的透亮的活细胞，4，细胞不贴壁，第二天就就死了，5，复苏的过程正常，37度速解冻。
请高手帮忙分析一下，或者遇到相同问题的朋友分析交流一下。
丁香园网友haha63认为：没按规定保存在液氮所致！细胞切 ... [阅读全文 ]
2008-07-15
·细胞的复苏经验总结 冻存与复苏 ]
在细胞复苏过程中，有多次复苏失败，最终在查阅了相关技术积累了足够的复苏技能后复苏成功，现将细胞复苏的操作程序和注意事项总结如下，望能为同行提供些参考。【材料】1. 常规细胞培养仪器设备、恒温水浴振荡器。2. 培养液（DMEM）胎牛血清（CBS）二甲基亚砜（DMSO）【操作程序】1. 细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min以上。2. 培养液（DME ... [阅读全文 ]
2008-06-21
·General Guide for Cryogenically Storing 冻存与复苏 ]
General Guide for Cryogenically Storing [阅读全文 ]
2008-06-26
·Freezing and Thawing Cultured Cells 冻存与复苏 ]
Freezing Cells:
1.Trypsinize cells and harvest in the normal way.
2.Count a 200 μl aliquot and determine the total cell number.From thiscalculate the volume of media required to give a final freezi ... [阅读全文 ]
2008-06-06
·细胞冻存复苏基本材料方法和细胞运输 冻存与复苏 ]
细胞株(系)的使用，为医学研究和测试工作带来了极大的方便。但细胞的传代是有限制的，长期连续传代的细胞，不仅消耗大量的人力和物力，而且细胞的生长与形态等会有一定退变或转化，因而细胞失去原有的遗传特性，有时还会由于细胞污染而造成传代中断，种子丢失。因此，在实际工作中常需冻存一定数量的细胞，以备替换使用。细胞冷冻与复苏是细胞培养室的常规工作和通用技术。
细胞的冻存
一、概述
目前，细胞冻存最常用的技术是 ... [阅读全文 ]
2008-06-06
·细胞冻存与复苏技术（二） 冻存与复苏 ]
复苏技术
1. 细胞复苏的原则
在实际操作中，冻存细胞要进行复苏，再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化，以避免慢速融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞。
2. 细胞复苏的主要操作步骤
（1）佩戴眼镜和手套，从液氮罐中取出安瓿或冷冻管。
（2）迅速放入38℃水浴中，并不时摇动，在1分钟内使其完全融化，然后在无菌下取出细胞。
（3）在1000r/min速度下离心5～ ... [阅读全文 ]
2008-06-06
·细胞冻存与复苏技术（一） 冻存与复苏 ]
概述
细胞培养技术自1907年开创以来，历经一个世纪现已成为自然科学领域不可缺少的研究方法之一。在细胞培养技术广泛用于科学研究领域的令天，细胞株的冷冻保存和解冻复苏这一基础技术日益得到重视。
低温保存是活体组织保存最常用的方法之一。冷冻保存一般是指在0— 196 oC进行保存，就是将体外培养物悬浮在加有或不加冷冻保护剂的溶液中，以一定的冷冻速率降至零下某一温度，并在此温度下对其长期保存 ... [阅读全文 ]
2008-06-06
·推荐一种简单实用的细胞冻存方法 冻存与复苏 ]
冻存液：一般用10%DMSO(推荐用sigema原装的，质量好不用预消毒)+10％血清的完全培养基，如果细胞珍贵的话最好用10％DMSO＋90％全血清。
降温方法：用最少两厘米厚的医用棉纱将冻存管紧紧包裹，扎紧，直接放入-70度冰箱，隔夜取出冻存管直接放液氮冻存。
复苏效果对比：细胞冻存2周后复苏，本方法冻存的细胞与使用程序性降温仪冻存的细胞复苏效果相差不大，但明显比传统4度、-20度、-70度的 ... [阅读全文 ]
2008-06-06
·细胞冻存、解冻方法与细胞计数 冻存与复苏 ]
一、细胞冷冻保存
1.材料：
生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、0.4％（w/v）trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII)
2、冷冻保存方法：
（1）传统方法: 冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟---& ... [阅读全文 ]
2008-06-06
·细胞冻存和复苏标准操作规程(SOP) 冻存与复苏 ]
背景知识 ：
细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。
原理 ：
细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻 ... [阅读全文 ]
2008-06-05
·动物细胞培养：细胞冻存与复苏 冻存与复苏 ]
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于一196~C液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。 细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5％．15％ ... [阅读全文 ]
2008-06-06
·细胞的冻存与复苏 冻存与复苏 ]
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，最佳的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(－70℃~－196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在－70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键， ... [阅读全文 ]
2008-06-06
·细胞的冻存与复苏 冻存与复苏 ]
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，最佳的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(－70℃~－196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在－70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键， ... [阅读全文 ]
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