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2008-09-10
·PBS相关资料 其他试剂 ]
PBS的配制：
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCL，0.2g KCL，1.44g 磷酸氢二钠和0.24克磷酸二氢钾，用HCL调节溶液的pH值至7.4，加水定容至1升，在1.034x10（5），高压蒸汽灭菌20分钟。室温保存。一般用于实验室中的PBS缓冲液都是这样配制，而不用摩尔分数表示。
PBS(Phosphate-buffered Saline) 分子克隆上的配方
NaCl: 8g
KCl: ... [阅读全文 ]
2008-09-10
·胶原酶 其他试剂 ]
丁香园网友yuanjianmei的问题为：
胶原酶2一定要用D-hank's液配制吗？
消化血管细胞一次要用多少啊？
丁香园网友张艳红的观点为：
用D-hank's液配制也可，但不一定。我做的是软骨细胞的原代培养，用的是1640完全培养基配制的。你消化血管细胞如果是做原代培养，我估计用6-8ml就可。我用时每次用8-10ml。当然，这也得视取用的组织特性和组织的量而定。仅供参考。
丁香园网友ww ... [阅读全文 ]
2008-08-27
·甲醇酵母表达常用溶液及缓冲液的配制 其他试剂 ]
1.毕赤酵母表达常用溶液及缓冲液的配制
1.1 各种母液的配制
10*YNB：（含有硫酸铵、无氨基酸的13.4%酵母基础氮源培养基） 4℃保存。34g酵母基础氮源培养基（无硫酸铵）+100g硫酸铵，溶于1000ml水中，过滤除菌。
500*B：（0.02%生物素 Biotin） 4℃保存 保存期为1年。20mg的生物素溶于100ml水中，过滤除菌。
100*H：（0.4%Histidi ... [阅读全文 ]
2008-08-24
·细胞培养常用器材与试剂 其他试剂 ]
器材与试剂
干粉型培养基、胰蛋白酶，青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器等
具体步骤
1. 水：
细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水.
2. PBS (也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：
主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗
溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HP ... [阅读全文 ]
2008-08-24
·GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？ 其他试剂 ]
GlutaMAX-I二肽是L－谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的α－氨基用L－丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L－谷氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L－谷氨酰胺几乎完全降解。 ... [阅读全文 ]
2008-08-24
·L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？ 其他试剂 ]
L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。
脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终确定。L－谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。 ... [阅读全文 ]
2008-08-24
·为什么要热灭活血清？ 其他试剂 ]
加热可以灭活补体系统。
激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 ... [阅读全文 ]
2008-08-14
·有关血清的常见问题 其他试剂 ]
血清是细胞培养中最重要的元素之一。因此，我们特别整理了一些实验室里常会遇到的问题，供大家参考：
1、保存血清最好的方法是什么？
我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。但是，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。反复冻融会对血清的品质造成不良影响。
2、如何解冻血清才不会使产品质量受损?
我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2 ... [阅读全文 ]
2008-08-10
·血清使用过程中应注意的问题 其他试剂 ]
一、关于血清使用的几点建议：
1、血清必须贮存-20℃，如存放于4℃，请勿超过两周，对于某些单位一次无法用完一瓶，可在无菌条件下将其40-45ml分装于无菌50ml离心管中(或血清瓶中)，由于血清解冻时体积会增加10％，必须预留此膨胀体积的空间，否则易发生污染或容器冻裂的情形。
2、一般公司所提供的血清一般为200ml和500ml装量，因此建议在使用中宜采取逐步解冻的方法解冻血清：-20℃&rar ... [阅读全文 ]
2008-08-10
·细胞培养瓶瓶盖通气问题 其他试剂 ]
问：有人说，corning盖子不通气的那种细胞培养瓶拧紧了还可以通气，因为它的特殊设计可以让二氧化碳进入。是这样的吗？我的经验是，拧紧和不拧紧里面的培养液颜色不同。
答：盖子不通气是要松开的，如果你选的是不通气的培养瓶就没有什么特殊设计了，我们也是用的那种不通气的，放入二氧化碳培养箱前都得旋松（拧紧后再稍微松一点）。至于旋松到什么程度，适量了，反正觉得能通气了就行。一般松开后放入培养箱后颜色会变成 ... [阅读全文 ]
2008-08-07
·血清使用问题的总结 其他试剂 ]
一、血清灭活问题。
1、问：加到培养基中的血清必须灭活吗？
答：不是必须的，看做什么实验了。
2、问：四季青胎牛血清灭活是56℃30分钟吗？
回答a：血清都是灭活是56℃30min。每次我都是这样灭活的。
回答b：应该是分血清的吧，若已灭活，就不用灭活了，未灭活，最好还是要灭活的。
回答c：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养 ... [阅读全文 ]
2008-08-06
·自制细胞实验的缺氧装置 其他试剂 ]
1.培养板(如96孔等)细胞实验的缺氧装置:
:塑料泡沫盒 1 个;橡胶导管两个;玻璃胶;
:如图;
:进气孔应该在里下位出气孔应在上外位(因为通的气体密度较大);导管 与泡沫盒连接处用玻璃胶封好.
:将培养板放入盒子后盖上盖子用纸胶封好然后往里通气(CO2和N2的混合气)10分接着用止血钳把两个导管夹住密封.最后可以把整个盒子放入37度孵箱内.
2.细胞瓶内细胞实验的缺氧装置:
:医用输液器; ... [阅读全文 ]
2008-07-17
·超净台里的酒精灯，有害无益？（图） 其他试剂 ]
我所在的实验室有用于培养细胞的超净台，内置酒精灯一个。老师传授授说在打开培养瓶或培养液之前要用酒精灯的火焰快速的烧一下，目的是消毒，减少污染。自己很怀疑这样做的有效程度，因为瞬间的火焰不可能将瓶口的温度升高很多，又如何达到消毒的目的呢？在网上搜索后找到一些资料，认为不应在超净台内使用火焰。现将其放到丁香园上供大家参考，希望有经验的同学给个说法，超净台内到底应不应该有酒精灯。
Open flames ... [阅读全文 ]
2008-07-16
·多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine）的配制、保存、使用总结 其他试剂 ]
因为自己做PC12细胞培养，想在接种前将培育皿用多聚赖氨酸包被，到园子里搜索了下，关于多聚赖氨酸的帖子不少，看了一些帖子，将大部分收集在此。个人觉得关于多聚赖氨酸的配置、保存、使用各方面问题，这些帖子里面都解释了。
注：我只是摘了一个帖子里某段或某句话。一般一段话来自某一位战友。
一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被。
二、其他常用包被方法比较( ... [阅读全文 ]
2008-07-15
·细胞培养用滤网的相关知识 其他试剂 ]
细胞培养用的筛网的相关知识，单位的含义及其与相关单位的换算。 [阅读全文 ]
2008-07-21
·细胞培养板的选择和使用 其他试剂 ]
细胞培养板的选择和使用 [阅读全文 ]
2008-07-11
·滤器相关问题 其他试剂 ]
1.滤器高压消毒时滤膜变小，为什么
丁香园网友dongwp的观点为：旋紧压住膜后高压灭菌就可以了，醋酸纤维膜会收缩，尼龙膜会好点。
2.滤膜破了，真空泵惹得祸？
丁香园网友worm27的观点为：
防细菌滤膜的网孔的直径为0.45微米以下，当溶液通过滤液后，细菌的细胞和真菌的孢子等因大于滤膜直径而被阻，在需要过滤灭菌的液体量大时，常使用抽滤装置；液量小时，可用注射器。使用前对其高压灭菌，将滤膜装在 ... [阅读全文 ]
2008-07-11
·滤器的使用 其他试剂 ]
1.针头滤器的使用
丁香园网友heyj的观点为：用滤膜孔径为0.22um的一次性针头滤器过滤胰酶，一次可以过滤100ml。如果想一次性过滤完可以准备1-2个备用的。注意在配胰酶溶液时尽量完全溶解，否则未溶的颗粒会堵住滤孔影响过滤速度。本人认为过滤效果与滤过的液体量无关。
丁香园网友ssl3304的观点为：过滤0.25的胰酶，一次可以滤1L，没有问题的，培养基最多300-400ml，总之一定要充分溶 ... [阅读全文 ]
2008-07-09
·滤器的清洗和消毒 其他试剂 ]
1.小过滤器如何清洗
丁香园网友bnucell的观点为：先用针管反复抽吸蒸馏水，之后超声20分钟左右，最后用蒸馏水浸泡5个小时以上，取出，40度左右烘干即可。其中的垫圈不要烘，自然晾干就可以了。
丁香园网友飘泊的观点为：小滤器使用后的清洗、消毒和其它可高压的塑料制品（聚丙烯、聚酯和聚偏二氯乙烯等等）一样，但聚乙烯不能高压。A. 流水反复冲十遍，干燥（高压时的温度是多少？之后还得干燥，垫圈我们同样拿 ... [阅读全文 ]
2008-07-09
·滤器的种类与选择 其他试剂 ]
1.不锈钢正压滤器
丁香园网友zhyjd的观点为：买不锈钢正压器时，看看厂家是否给带气囊，如果带就没有必要买了，其实买膜的地方他都会有不锈钢正压器的，滤器先要洗干净，装好滤膜，包装起来高压后，在超净工作台上操作。
2.玻璃滤器
多年前（80年代）刚开始做细胞培养时，使用的是G6型玻璃滤器用于除菌过滤培养液，使用前必须经过泡酸，自来水清洗，蒸馏水过滤，然后再包装，高压灭菌后用于过滤培养液。
3.过 ... [阅读全文 ]
2008-06-15
·血清热灭活―您是否在浪费时间？ 其他试剂 ]
血清的热灭活是很多培养者感兴趣的话题，价格不菲的血清中含有诸如生长因子，维生素，氨基酸等珍贵物质，而将它们置于50℃以上的温度长达30分钟是完全没有必要的。尽管如此，在大多数实验室之中血清的热灭活还是作为常规来执行，多数实验者并没有考虑热处理对血清中的生长因子，氨基酸等成分带来的负面影响，在我们的技术热线中最常被提到的就是否该对血清进行热灭活，下面我们就对胎牛血清的热灭活进行一些探讨和解释。 [阅读全文 ]
2008-06-16
·Serum Thawing & Heat Inactivation 其他试剂 ]
How to thaw serum:
Serum that is stored at -10º C to -40º C is stable for extended periods of time. It is neither necessary or desirable to store serum at -70º C as it does not prolong ... [阅读全文 ]
2008-06-10
·细胞培养常见问题及解答 其他试剂 ]
1.为什么要热灭活血清？
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。
2.L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？ L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L ... [阅读全文 ]
2008-06-06
·细胞实验技术及基本知识（三） 其他试剂 ]
器械的清洗和消毒
玻璃器械洗消： 一、新的玻璃器皿的洗消： 1.自来水刷洗，除去灰尘。
2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g：浓硫酸200ml：蒸馏水1000ml）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿 ... [阅读全文 ]
2008-06-02
·细胞培养中的一些试剂 其他试剂 ]
一、纺锤体阻断剂（Spindle inhibitor） 在有丝分裂过程中，随着纺锤丝的形成，染色体被牵引到一起难以观察其形态。纺锤体的形成在于细胞质和纺锤体成分的粘度之间的平衡，因此，改变细胞质的粘度，即可破坏纺锤体形成，从而使得染色体均匀散开，且染色体缢痕区更为清楚。 在培养中使用的纺锤体阻断剂为秋水仙素，在终止培养前加入适量秋水仙素，使正在分裂的细胞停留在中期，以获得大量分裂相供分析之用。 ... [阅读全文 ]
2008-06-05
·细胞生存条件 其他试剂 ]
1．基本营养物质 （1）糖：六碳糖主要能源、维持渗透压，含葡萄糖1-5%。 （2）氨基酸：维持生存需12种氨基酸（精、胱、亮、异亮、赖、蛋、苯丙、苏、色、组、酪、缬）。谷氨酰胺需量最大缺乏时细胞生长不良。 单 细胞培养 或细胞量少时所需氨基酸的种类和量增多，细胞主要利用左旋氨基酸异构体。 （3）维生素：细胞大部分需水溶性B族维生素，Vitc不可少，1-10mg/100ml可促进正常细胞生长繁殖。
... [阅读全文 ]
2008-06-05
·水与平衡盐溶液 其他试剂 ]
1.培养用水:体外培养的细胞对水质特别敏感，对水的纯度要求较高。培养用水中如果含有一些杂质，即使含量极微，有时也会影响细胞的存活和生长，甚至导致细胞死亡。用金属蒸馏器制备的蒸馏水，可能会含有某些金属离子，一般不作为培养用水。配制培养用液应使用经石英玻璃蒸馏器三次蒸馏的三蒸水或超纯水净化装置制备的超纯水。最好用龙头瓶贮存，存放时间一般不应超过2周。
2.缓冲溶液、生理盐水、平衡盐溶液 ... [阅读全文 ]
2008-06-10
·细胞培养中的一些试剂 其他试剂 ]
一、纺锤体阻断剂（Spindle inhibitor）
在有丝分裂过程中，随着纺锤丝的形成，染色体被牵引到一起难以观察其形态。纺锤体的形成在于细胞质和纺锤体成分的粘度之间的平衡，因此，改变细胞质的粘度，即可破坏纺锤体形成，从而使得染色体均匀散开，且染色体缢痕区更为清楚。
在培养中使用的纺锤体阻断剂为秋水仙素，在终止培养前加入适量秋水仙素，使正在分裂的细胞停留在中期，以获得大量分裂相供分析之用。秋水 ... [阅读全文 ]
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