丁香通

四、细胞计数要点：

1、进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于104个/ml，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中；

2、要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。

3、取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其时多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀，以求计数准确；

4、数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计右线，不计左线。

5、操作时，注意盖片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。

五、初学者易犯的错误：

1、计数前未将待测悬液吹打均匀。

2、滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。

3、滴入悬液时的量太多，至使细胞悬液流入旁边的槽中。

六、本实验特殊试剂的配制：

4％台盼蓝母液：称取4克台盼蓝，加入少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100毫升，用滤纸过滤，4℃保存。

使用液：使用时，用PBS稀释母液至0.4％即可。

细胞的冻存

1、先将冻存管放入4℃冰箱，约40min。

2、接着置于-20℃冰箱，约30-60min。

3、置于-80超低温冰箱中放置过夜。

4、置于液氮罐中长期保存。

5、同时做好冻存记录，在自己的笔记本和冻存记录本上均要记录。

注意事项：

1、使用DMSO前，不需要进行高压灭菌，它本身就有灭菌的作用。高压灭菌反而会破华它的分子结构，以至于降低冷冻保护效果。在常温下，DMSO对人体有害，故在配制时最好戴上手套操作。

2、不宜将冻存细胞放置在0℃～-60℃这一温度范围内过久，低温损伤主要发生在这一温度区内，是“危险温区”。

3、注意定期检查液氮罐内液氮量，及时添加。