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2008-11-02 ·RNAi与基因沉默 - [RNAi]
这是一个介绍RNA干扰(RNAi)机制的课件。该PPT教程除了介绍小干扰RNAs(siRNAs),还介绍了microRNAs。 [阅读全文]
2008-06-27 ·RNAi原理图解 - [RNAi]
Long double-stranded RNAs (dsRNAs; typically >200 nt) can be used to silence the expression of target genes in a variety of organisms and cell types (e.g. worms fruit flies and plants). Upon introd ... [阅读全文]
2008-06-30 ·RNAi优于其它方法的优点 - [RNAi]
基因敲除和转基因动物是功能缺失表型研究的主要方法。然而,获得这些动物是一个漫长而且费用昂贵的过程,同时很多基因的缺失会导致胚胎致死表型,使得基因敲除变得不再可能。 灭活蛋白功能的方法包括结构域阴性突变构建和分析,和使用抗体和aptamers。但是,这可能需要花费一些时间确定什么构型和结构有功能,而且它们似乎只对某些靶标有作用。 有两种方法被用来调节mRNA的更新,反义mRNA和核酶(ribozym ... [阅读全文]
2008-06-30 ·The TRC shRNA Design Methods and Rules - [RNAi]
Overview We design shRNA molecules with an algorithm. Our algorithm uses several criteria to rank potential 21mer targets within each human and mouse Refseq transcript. The algorithm applies a set of ... [阅读全文]
2008-06-30 ·RNA干扰在人类T细胞的应用 - [RNAi]
alimama_pid="mm_10043573_137377_1822161"; alimama_titlecolor="FF9900"; alimama_descolor ="552c55"; alimama_bgcolor="f7f7f7"; alimama_bordercolor="f7f7f7"; alimama_linkcolor="552c55"; ... [阅读全文]
2008-06-27 ·如何知道什么序列具有RNAi效应? - [RNAi]
为了分析特异siRNA 序列在基因活性上的效应,必须知道导入siRNA 的序列。这将要求设计合成寡核苷酸或者载体上的短的发夹RNA (siRNA )序列,转染后检测基因的阻断。而dicer酶切的siRNA (d-siRNA )导入细胞后,由于d-siRNA 库中通常都有好几种有效的siRNA 序列,它们在起始RNA i反应尤其有效。 然而目前还没有方法确定在这个库中起作用的特异的序列。 ... [阅读全文]
2008-06-30 ·RANi术语表 - [RNAi]
RNA干扰是最近发现的一种功能工具。当RNA导入一个细胞时,最终会引起细胞内互补mRNA的降解,从而导致基因功能活性的阻断。 PTGS转录后基因沉默(posttranscriptionalgenesilencing);一种首先在植物中确定,然后发现在动物中也存在的现象。尽管PTGS最初被描述作一种病毒防御和转位子沉默的内源方法,现在它已经成为一种新的令人激动的研究工具��RNAi干扰。 协同抑制( ... [阅读全文]
2008-06-30 ·RNAi基础知识介绍 - [RNAi]
Rnai 最近由于RNA 干扰(RNA interference,RNA i)的发现使反义领域的研究增多。这种自然发生的现象最早是在秀丽线虫中发现的(1),是序列特异性地使转录后的基因沉默的有力机制。由于最近两年在RNA i领域取得的进步,已经有许多这方面的综述发表(2-4)。RNA 干扰是由长的双链RNA 分子发动的,该分子可以被Dicer enzyme加工成长度为21-23个核苷酸的RNA ( ... [阅读全文]
2008-07-07 ·RNAi在细胞培养中的应用 - [RNAi]
The protocols listed here are for Drosophila cells in 6 well plates and our pre-aliquoted 384 well plates. RNAi experiments may be done in other size plates just scale up or down. Adopted from Clemens ... [阅读全文]
2008-06-30 ·RNA干扰技术获得新突破 - [RNAi]
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2008-06-30 ·Bacteria-mediated RNAi - [RNAi]
1)  Place gene of interest between T7 promoters in Òdouble T7Ó plamsid.  (slightly more difficμlt alternative:  Place gene of interest in hairpin/inverted repeat config ... [阅读全文]
2008-06-30 ·RNAi效果的测量 - [RNAi]
检测基因特异阻断的最常用的方法是进行westernblot分析,比较导入siRNA 前后蛋白表达水平的变化。在一些情况下可能使用检测报告子基因的报告子系统例如β-半乳糖苷酶。也可以应用实时PCR(例如通过使用LUX™引物)或者其它类型基于细胞的分析检测细胞中转录本的水平。 ... [阅读全文]
2008-06-30 ·通过RNAi使基因特异性沉默 - [RNAi]
RNA interference (RNAi) is a phenomenon in which the introduction of double-stranded RNA (dsRNA) into a diverse range of organisms and cell types causes degradation of the complementary mRNA (Figure 1 ... [阅读全文]
2008-06-30 ·果蝇RNAi的实验中双链短RNA的合成(dsRNA)方法 - [RNAi]
本文来自于哈佛大学医学院果蝇RNAi 筛选中心的经典实验方法,专门用于果蝇RNAi 实验方法。感谢哈佛大学医学院果蝇RNAi 筛选中心的支持! A. Primer Designed dsRNA B. Template Selection C. PCR D. In vitro RNA Transcription E. dsRNA Purif ... [阅读全文]
2008-06-30 ·什么是RNA interference(RNAi) - [RNAi]
RNA interference (RNAi ) by double stranded RNA (dsRNAs) molecules of approximately 20-25 nucleotides termed short interfering (siRNAs) is a powerful method for preventing the expression of a particul ... [阅读全文]
2008-07-07 ·RNAi: Background Information - [RNAi]
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2008-06-30 ·RNAi基因沉默方法 - [RNAi]
大约在十年前,2006年诺贝尔生理/医学奖得主CraigMello和AndrewFire发现,他们能够将短RNA 分子插入到线虫中并沉默特定基因的表达。今天,研究人员也常常使用这种强大的RNA 干扰方法来研究哺乳动物系统中的特定基因功能。 为了进行这种基因沉默实验,研究人员通常需要依赖化学合成的RNA 分子,而这个合成过程是相当昂贵的。本月《冷泉港实验手册》(ColdSpringHarborPro ... [阅读全文]
2008-07-07 ·新型RNase抑制剂 - [RNAi]
RNA 酶污染是全体从事 RNA 相关实验的人员的头号公敌。即使是100度高温或者是高压灭菌也不能完全灭活无孔不入的 RNases 。因而相关的实验中往往要用到RNA 酶抑制剂。最常用的 RNA 酶抑制剂 Human Placental ribonuclease inhibitor ( HPRI )是一种蛋白质,可与多种 RNA 酶(包括 RNases A B C 类)非共价结合成为等摩尔复合物, ... [阅读全文]
2008-06-30 ·增进RNAi分析的强大工具 - [RNAi]
利用RNAi的威力 RNA干扰(RNA interference RNAi)正在迅速成为最受欢迎的阻断特异基因表达的技术。RNAi技术允许科学家关闭他们想要研究的基因,这是一种全新的令人激动的研究方法,通过研究基因表达缺失时细胞的表型,以确定基因的功能。最初,通过在无脊椎动物如:果蝇(Drosophila)和线虫(C. elegans)导入长的双链RNA,揭示了RNAi是一种降低特异基因表达的强有 ... [阅读全文]
2008-06-28 ·用RNase III制备siRNA库来诱发RNAi - [RNAi]
小分子干扰RNA (Small interfering RNA ,siRNA ) 是一种非常有效的工具,能够在包括哺乳动物细胞在内的多个体系中抑制特定基因的表达,从而研究某个基因的功能或者是相关信息。但是这种强有力的方法的难题之一是需要设计,合成siRNA s 和验证其效果,从而找到最有效的siRNA s 。这个过程需要花费相当的时间和经费。以化学法合成基因特异的siRNA s 为例,由于设计好的 ... [阅读全文]
2008-06-30 ·什么是RNA interference(RNAi) - [RNAi]
RNA interference (RNAi ) by double stranded RNA (dsRNAs) molecules of approximately 20-25 nucleotides termed short interfering (siRNAs) is a powerful method for preventing the expression of a particul ... [阅读全文]
2008-06-28 ·He Tube Mating with MSCV recipient - [RNAi]
Chemicals needed: Glucose   L-(+)-Arabinose   Sigma Cat # A3256 L-Rhamnose  Sigma cat # R3875 Cb (carbenicillin)  Sigma cat # 1389 DL-p-Chlorophenylalanine  Sigma ... [阅读全文]
2008-06-30 ·RNAi实验原理与方法 - [RNAi]
近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞 ,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。 一、RNAi的分子机制 通过生化和遗传学研究表明,RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation ... [阅读全文]
2008-06-30 ·RNAi技术:体外转录合成双链RNA - [RNAi]
在植物、昆虫、原生动物体内都发现了自然存在的RNAi现象,实验表明通过目的基因序列的双链RNA可以诱导产生基因沉默现象。要制备较长的dsRNA,最简单的方法就是体外转录合成双向的RNA。如果研究对象不是哺乳动物细胞,那要开展RNAi的实验就要简单很多。因为可以采用较长的双链RNA诱导RNAi现象,而无需制备特定的siRNA。在这里生物通将介绍几个制备长链dsRNA的试剂盒。(值得注意的是在哺乳动物 ... [阅读全文]
2008-06-30 ·RNAi在植物中的应用 - [RNAi]
RNA沉默是广泛存在于生物中的一种古老现象,是生物抵抗异常DNA的一种保护机制同时在生物生长发育过程中扮演着基因表达调控的角色。文章对RNA沉默研究中的几个热点问题进行了介绍,按RNA沉默持续时间的不同对其在植物中应用的方法进行了分析,并重点论述了RNA沉默在植物功能基因组研究、作物品质改良以及抗病毒植物培育等方面的应用及其发展前景。 RNA沉默(RNAsilencing)是一种结合和降解特异mR ... [阅读全文]
2008-06-30 ·96 Well Mating Protocol platewise - [RNAi]
Chemicals needed:Glucose       L-(+)-Arabinose  Sigma Cat # A3256 L-Rhamnose Sigma cat # R3875 Cb (carbenicillin) Sigma cat # 1389DL-p-Chlorophen ... [阅读全文]
2008-06-28 ·The pSico and pSicoR Design and Cloning - [RNAi]
pSico Oligo Design Click on the Mac OSX program pSicoOligomaker 1.5 to select and design oligos for pSico and plentilox3.7. To operate it simply paste your sequence in the "sequence" window ... [阅读全文]
2008-06-30 ·shRNA 资源库及其构建方法 - [RNAi]
1.NCBIshRNA资源库 http://cgap.nci.nih.gov/RNAi About RNAi on CGAP The NCBI is part of the consortium supporting the preparation of human and mouse libraries containing RNAi constructs that target cance ... [阅读全文]
2008-06-28 ·RNAi术语表 - [RNAi]
RNA i Glossary Dicer - Dicer is a member of the RNase III family of nucleases that specifically cleave double-stranded RNA s. Dicer processes long dsRNA into siRNA of 21-23 nt. Interferon - A small ... [阅读全文]
2008-06-30 ·RNAi实验中双链短RNA(dsRNA)制备过程 - [RNAi]
RNAi 实验中双链短RNA(dsRNA)制备过程,本实验方法来自于加州大学Jim教授实验,很权威! Procedure for the Generation of dsRNA for use in RNAi 1. Design polymerase chain reaction (PCR ) primers that will amplify 600-800 bp of sequenc ... [阅读全文]