选择分类浏览:
< 蛋白质技术 - 523 篇
+ 2D电泳技术 - 31 篇
2008-11-02
·2D电泳影像研究技术 2D电泳技术 ]
如何运用ACM技术在蛋白质2D电泳影像筛选蛋白质点？如何运用LBG演算法及向量量化高速影像？……运用2D电泳影像研究技术处理蛋白质2D电泳后的信息，看看这一课件吧！
... [阅读全文 ]
2008-08-22
·琼脂糖凝胶电泳法分离LDH同工酶及血清LDH总活力的测定 2D电泳技术 ]
一、目的：
1.学习琼脂糖聚胶电泳的原理和方法；
2.学习酶专一性染色原理及其应用；
3.掌握分离LDH同工酶的方法；
4.学习测定血清LDH总活力的原理与方法。
二、原理：
能催化同一反应而蛋白质结构不同的酶，称为同工酶。同工酶的蛋白结构既然有差别，它们的理化性质也就有所差异。因此可用电泳或其他方法将它们分离开来。例如乳酸脱氢酶（LDH）同工酶，它们都能催化乳酸脱氢产生丙酮酸，但经电泳 ... [阅读全文 ]
2008-08-22
·生物化学实验常用技术:电泳技术 2D电泳技术 ]
带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。如带正电荷的粒子向负极移动，带负电荷的粒子向正极移动。电泳技术是生物化学与分子生物学中的重要研究方法之一，利用电泳技术可分离许多生物物质，包括氨基酸、多肽、蛋白质、脂类、核苷、核苷酸及核酸等，并可用于分析物质的纯度和分子量的测定等。
电泳的基本原理
许多生物分子都带有电荷，在电场作用下可发生移动。由于混合物中各组分所带电荷性质、数量以 ... [阅读全文 ]
2008-08-22
·血清蛋白琼脂糖凝胶电泳 2D电泳技术 ]
【原理】
琼脂糖（agarose）是经过挑选，以质地较纯的琼脂（agar）作为原料而制成的。琼脂在化学上是由琼脂糖和琼脂胶组成的复合物。琼脂胶是一含有硫酸根和羟基的多糖，它具有离子交换性质，这种性质会给电泳及凝胶过滤以不良的影响。琼脂糖是直链多糖，它由D－半乳糖和36－脱水－L－半乳糖的残基交替排列组成。
琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。电泳时因凝胶含水量大（98－99%），近似自由电泳，因为固体支 ... [阅读全文 ]
2008-08-22
·核酸凝胶电泳观察法 2D电泳技术 ]
实验原理：琼脂糖是海藻中提取的线状高聚物，不同浓度的琼脂糖密度不同，一般PCR产物使用2%浓度，0.5Kb-10Kb的DNA使用1%浓度，基因组DNA使用0.3%-0.7%浓度；不同大小的核酸在同一浓度的凝胶中迁移率不同，因为分子越大其受琼脂糖的阻力越大，迁移率与碱基对的对数值成反比；同分子量不同构象的核酸迁移率也不同，超螺旋环状DNA迁移率〉线状DNA迁移率〉带切口环状DNA迁移率。
荧光染料溴 ... [阅读全文 ]
2008-08-22
·等电聚焦[IEF]电泳技术 2D电泳技术 ]
等电聚焦（isoelectric focusing，IEF）是60年代中期问世的一种利用有pH梯度的介质分离等电点不同的蛋白质的电泳技术。由于其分辨率可达0.01pH单位，因此特别适合于分离分子量相近而等电点不同的蛋白质组分。
⒈IEF的基本原理 在IEF的电泳中，具有pH梯度的介质其分布是从阳极到阴极，pH值逐渐增大。如前所述，蛋白质分子具有两性解离及等电点的特征，这样在碱性区域蛋白质分子带负电 ... [阅读全文 ]
2008-08-22
·等电聚焦[isoelectric focusing] 2D电泳技术 ]
等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质，当通以直流电时，两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度，当蛋白质放进此体系时，不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上，电聚焦的优点是：有很高的分辨率，可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开；一般电泳由于受扩散作用的影响，随着时间和所走的距离加长，区带越走越宽，而电聚焦能抵消扩散作用，使区带越走越窄；由于这种电聚焦 ... [阅读全文 ]
2008-08-22
·内切酶的特性、酶解与琼脂糖凝胶电泳 2D电泳技术 ]
学习和掌握限制性内切酶的特性、酶解和琼脂糖凝胶电泳的操作方法，理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具，琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定DNA片段的有效方法。
限制性核酸内切酶：
是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解酶。是体外剪切基因片段的重要工具，所以常常与核酸聚合酶、连接酶以及末端修饰酶等一起称为工具酶。
琼脂糖凝胶电泳：
是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性， ... [阅读全文 ]
2008-08-22
·肿瘤琼脂糖凝胶电泳标本的拍摄方法 2D电泳技术 ]
在医学肿瘤科学实验中分子生物学、生物化学等一些科学实验必须通过肿瘤电泳图像来加以验证和评定。实验的最后结果一旦完成就应及时地用摄影的手段把它记录下来。由于肿瘤电泳标本实验结果显现的时间有限来不及请专业摄影师的协助。因此实验结果的拍摄任务大多由实验人员亲自操作。由于实验室工作人员对摄影知识掌握的程度有别往往由于肿瘤电泳标本的拍摄失误而造成整个实验过程的失败。为保证肿瘤电泳标本的拍摄质量避免因拍摄失误 ... [阅读全文 ]
2008-08-22
·凝胶电泳操作注意事项 2D电泳技术 ]
1.缓冲系统：在没有离子存在时，电导率最小，DNA不迁移，或迁移极慢，在高离子强度的缓冲液中，电导很高并产热，可能导致DNA变性，因此应注意缓冲液的使用是否正确。长时间高压电泳时，常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。
2.琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。
3.凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶解的凝 ... [阅读全文 ]
2008-08-22
·植物过氧化物酶同工酶测定 2D电泳技术 ]
凡能催化同一种化学反应，但其分子结构和带电性质不同的一组酶称同工酶（isoenzyme）。同工酶谱的差异是基因表达的差异造成的，所以在研究植物基因调控与生长发育及其与环境条件的关系以及许多生理生化和遗传问题时，常常要分析同工酶谱的差异。因此，同工酶研究在理论和实践中都有非常重要的意义。
一、原理
聚丙烯酰胺凝胶由丙烯酰胺和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化剂作用下聚合而成，具有三维网状结构，其网孔大小可由 ... [阅读全文 ]
2008-08-21
·免疫电泳实验 2D电泳技术 ]
免疫电泳（immunoelectrophoresis ）是将电泳和琼脂扩散结合起来，用于分析抗原组成的一种定型方法，具有灵敏快速的优点。该实验可分为如下两个步骤：
1.电泳 将待检的可溶性物质在琼脂板上进行电泳分离。由于各种可溶性蛋白分子的大小、质量与所带电荷不同，在电场的作用下，其带电分子的运动速度具有一定的规律，因此通过电泳能够把混合物中的各种不同成分分离开。
2.琼脂扩散 电泳后在琼脂槽中 ... [阅读全文 ]
2008-08-21
·双向电泳样品缓冲液选用的基本原则 2D电泳技术 ]
1、蛋白质样品的特征：
复杂，含盐或其他污染物
易被蛋白酶降解
动态范围宽（>X106）
溶解性不均一（疏水性/亲水性）
分子量、等电点的范围宽（10-500KDa，pH2-14）
2、样品分离的基本要求：
高灵敏度和分辨率
宽动态范围
小样品体积
高通量
合适的温度和pH
避免蛋白酶降解
适合与高灵敏度的质谱联用
尽量少的操作步骤减少污染和损失
3、样品缓冲液的组成：
3.1 尿素：一种中 ... [阅读全文 ]
2008-08-21
·双向电泳资料 2D电泳技术 ]
Amersham_ch.pdf
Biorad_ch.pdf ... [阅读全文 ]
2008-08-21
·双向电泳实验过程及相关溶液配置 2D电泳技术 ]
A． 实验过程
一、实验原理：
2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离，第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同，而将一向分离后的蛋白进一步分离。这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。
二、实验步骤：
1.样品的溶解
取纯化后的晶体蛋白3.0mg，加入300μl裂解液(1mg蛋白:100μl裂解液)振荡器上振荡10min左右，共处理一个小时。其中每隔10～ ... [阅读全文 ]
2008-08-21
·双向电泳完整的操作步骤 2D电泳技术 ]
（一）第一向等电聚焦
1.从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室温溶解。
2.在小管中加入0.01g DTT，Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混匀。
3.从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品，充分混匀。
4.从冰箱中取-20℃冷冻保存的IPG预制胶条（17cm pH 4-7），室温中放置1 ... [阅读全文 ]
2008-08-21
·双向电泳研究进展 2D电泳技术 ]
点击查看双向研究进展.pdf ... [阅读全文 ]
2008-08-21
·电泳技术 2D电泳技术 ]
电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。
电泳技术的基本原理和分类
在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。F＝QE质点的前移同样要受到阻力（ ... [阅读全文 ]
2008-08-21
·二维聚丙烯酰胺凝胶电泳原理介绍 2D电泳技术 ]
二维聚丙烯酰胺凝胶电泳技术结合了等电聚焦技术（根据蛋白质等电点进行分离）以及SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（根据蛋白质的大小进行分离）。这两项技术结合形成的二维电泳是分离分析蛋白质最有效的一种电泳手段。
通常第一维电泳是等电聚焦，在细管中（φ1～3 mm）中加入含有两性电解质、8M的脲以及非离子型去污剂的聚丙烯酰胺凝胶进行等电聚焦，变性的蛋白质根据其等电点的不同进行分离。而后将凝胶从管中取 ... [阅读全文 ]
2008-08-21
·电泳技术简介 2D电泳技术 ]
电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。
电泳技术的基本原理和分类
在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。F＝QE质点的前移同样要受到阻力（ ... [阅读全文 ]
2008-08-07
·2D Gel Electrophoresis（图） 2D电泳技术 ]
This is a method for the separation and identification of proteins in a sample by displacement in 2 dimensions oriented at right angles to one another. This allows the sample to separate over a lar ... [阅读全文 ]
2008-07-25
·应用双向电泳、免疫印迹和质谱技术筛选子宫内膜异位症标志物 2D电泳技术 ]
目的:寻找子宫内膜异位症标志物。方法:提取子宫内膜异位症和非内膜异位症子宫在位内膜总蛋白后用双向电泳技术进行分离 Phoretix 2D软件分析凝胶图像经数据库查询初步鉴定差异表达蛋白质。卵巢子宫内膜异位症(巧克力囊肿)组织总蛋白双向电泳后转膜用患者血清和正常血清作为一抗行Western blot检测比较杂交蛋白点的差异取差异点用MALD I2TOF2MS分析根据其肽质量指纹图谱进行数据库查询鉴 ... [阅读全文 ]
2008-07-25
·天麻蛋白质的双向电泳和肽质量指纹谱分析与鉴定 2D电泳技术 ]
摘要: 采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱技术对天麻染菌球茎皮层和不染菌的新生球茎皮层进行了比较蛋白质组分析与鉴定。双向电泳后在分子量12～97 kD、等电点3～10 范围内 每块胶分离到约900 个蛋白质点。对新生球茎中表达量明显增加的5 个蛋白质点用基质辅助激光解吸P电离飞行时间质谱(MALDI2TOF MS) 进行肽质量指纹谱的分析 并通过检索不同的数据库进行蛋白质鉴定与功能预测 初步认为第4 ... [阅读全文 ]
2008-07-25
·急性脊髓损伤蛋白质的双向电泳分析和质谱鉴定 2D电泳技术 ]
摘要:目的 建立急性脊髓损伤双向凝胶电泳图谱初步观察急性脊髓损伤组织中蛋白质组的变化与差异表达为进一步探讨急性脊髓损伤分子机制奠定了基础。方法 采用双向凝胶电泳分离脊髓总蛋白银染显色Image Master图象分析系统分析从胶中选取分离蛋白质点基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI2TOF2MS) 分析获取肽质量指纹图谱(PMF) Mascot 软件搜索MSDP、SWISS2PROT数据库鉴 ... [阅读全文 ]
2008-07-25
·双向凝胶电泳-飞行时间质谱法分析人肺鳞癌细胞HCL-H520蛋白质组成份 2D电泳技术 ]
双向凝胶电泳_飞行时间质谱法分析人肺鳞癌细胞NCI_H520蛋白质组成分.pdf ... [阅读全文 ]
2008-07-25
·抑郁大鼠海马的双向凝胶电泳图谱分析 2D电泳技术 ]
背景及目的 抑郁症发病机制不清。结构影像、遗传、神经生化的研究都从不同角度阐述了抑郁症的发病机制，种种证据也显示抑郁症的发病在脑代谢层面是有其器质性基础的，但至今还无明确、统一的结论。蛋白质组学技术为抑郁症发病机制的研究提供了新的手段。本研究通过建立抑郁症的动物模型，利用双向电泳和质谱鉴定技术，分析海马组织差异蛋白质表达，旨在探索抑郁症新的治疗靶点，为建立客观的诊断、治疗、停药指标提供 ... [阅读全文 ]
2008-07-31
·2-D Polyacrylamide Gel Electrophoresis 2D电泳技术 ]
This method was successful in our lab using prostate tissue and for our specific objectives.Investigators must be aware that they will need to tailor the following protocol for their own research obje ... [阅读全文 ]
2008-07-28
·2-D Polyacrylamide Gel Electrophoresis 2D电泳技术 ]
This method was successful in our lab using prostate tissue and for our specific objectives.Investigators must be aware that they will need to tailor the following protocol for their own research obje ... [阅读全文 ]
2008-07-28
·蛋白质双向电泳过程与体会 2D电泳技术 ]
双向电泳IEF （sigma）IEF（not IPG）/SDS-PAGE最简单的装备推荐如下，适合于没多少money做IPG又想做“热”的所谓蛋白质组的，嘻嘻！
IEF用Biorad的圆盘电泳槽（不行用国产的吧，不推荐），SDS-PAGE用六一厂的就可以了（ft，六一厂应该给我money吧，给你做广告了）（money不是很多的强烈推荐六一的，买进口电泳槽的钱留出来测搞出的 ... [阅读全文 ]
2008-07-24
·Sample preparation (analytical gels) 2D电泳技术 ]
Sample preparation and solubilization are crucial factors for the overall performance of the 2-D PAGE technique.Protein complexes and aggregates should be completely disrupted in order to avoid appear ... [阅读全文 ]
Copyright © 2008-2012